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在哺乳动物体内,免疫球蛋白受体在免疫防御中起着重要作用,而负责运输免疫球蛋白G（IgG）的新生儿Fc受体（FcRn）（α链）及负责运输免疫球蛋白A（IgA）和免疫球蛋白M（IgM）的聚合免疫球蛋白受体（pIgR）分别由FCGRT和PIGR基因编码。为了制备抗双峰驼FcRn和pIgR的多克隆抗体,为本实验室后期进一步研究双峰驼免疫球蛋白受体在其不同黏膜表面的分布规律和黏膜免疫反应之间的关系提供依据。本研究由以下两方面构成:（1）首先分别从NCBI收录的双峰驼FCGRT和PIGR基因序列中选取编码区,经跨膜结构和信号肽预测分析,截取不含信号肽的膜外序列,经酶切位点预测后构建重组质粒pET-28a-FcRn和pET-28a-pIgR;然后,将其分别转入感受态细胞BL21（DE3）和Rosetta（DE3）中,经1.0 mmol·L-1 IPTG诱导表达6 h后进行SDS-PAGE检测。接着,分别以0.1 mmol·L-1、0.3 mmol·L-1、0.5 mmol·L-1、0.7 mmol·L-1、0.9 mmol·L-1、1.0 mmol·L-1的IPTG浓度诱导6 h后,制样SDS-PAGE检测;以最佳IPTG诱导浓度分别诱导1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h、7 h、8 h、9 h、10 h后,制样SDS-PAGE检测;最后,将挑菌培养的LB培养基按1:100转接到灭菌的2×YT培养基中（含Kan+）,当OD600值达到0.6?0.8时,以最佳IPTG诱导浓度和最佳诱导时间诱导表达,收集菌体、洗涤、反复冻融3次后,冰浴超声破碎至液体清亮为止,离心分别收集上清和沉淀,制样进行SDS-PAGE检测。结果表明:双峰驼FcRn和pIgR重组蛋白以包涵体的形式成功表达,大小与预期一致,分别为34 KDa和71 KDa;其最佳IPTG诱导浓度为0.3 mmol·L-1和0.1 mmol·L-1,最佳诱导时间为6 h和7 h。（2）将富含包涵体的沉淀用含有尿素的Binding Buffer溶解,用Ni柱纯化,收集洗脱液,绘制洗脱曲线;接着,带入牛血清白蛋白标准曲线计算目的蛋白的蛋白含量,并制样进行SDS-PAGE检测;然后,分别与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂充分乳化,采用背部皮下、肩胛部及腘淋巴结多点注射方式免疫家兔,待第四次免疫6 d后,心脏采集血液并分离血清,取适量进行间接ELISA和Western blotting检测。结果表明:双峰驼FcRn和pIgR重组蛋白含量在第二管时达到了最高峰值,分别为4.400 mg·mL-1和1.804 mg·mL-1;SDS-PAGE检测纯化后的重组蛋白纯度高,无杂蛋白,大小分别为34 KDa,71 KDa;间接ELISA检测血清效价分别为1:32000,1:64000;Western blotting鉴定在膜上有明显的蛋白印迹出现,说明该兔抗双峰驼FcRn和pIgR抗体能与重组蛋白特异性结合,即具有反应原性。故本试验已成功制备了高效价和特异性良好的抗双峰驼FcRn和pIgR的多克隆抗体,旨在为本实验室后期对双峰驼免疫球蛋白受体在其不同黏膜表面的分布规律和黏膜免疫反应之间关系的研究奠定基础。