葡萄糖和氨基酸通过mTORC1信号通路影响小鼠皮肤成纤维细胞生长

来源 :重庆医科大学 重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ericawanghnu
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实验目的:研究葡萄糖和亮氨酸对小鼠皮肤成纤维细胞生长的影响及mTORC1信号通路在葡萄糖和亮氨基酸影响成纤维细胞生长过程中的作用。方法将小鼠皮肤成纤维细胞培养在含不同浓度葡萄糖及亮氨酸的培养基里,用MTT法检测细胞增殖,用Annexin V/PI法检测细胞凋亡,PI法流式细胞技术检测细胞周期,7-MGTP pulldown实验检测细胞翻译起始情况,Western blot检测翻译起始相关蛋白的表达及mTORC1信号通路分子的活化。结果当只增加培养基中葡萄糖浓度至15mmol/L或者增加亮氨酸浓度至24mmol/L时都会增加与7-MGTP结合的翻译起始因子(eIF4E、eIF4G),形成的有活性的翻译起始复合物(eIF4F)增加,mTORC1信号通路活化,促进与蛋白质翻译起始过程有关蛋白分子的表达,促进L929成纤维细胞增殖(P<0.05),抑制凋亡,细胞周期停留在S期;而同时增加葡萄糖浓度至15mmol/L和亮氨基酸的浓度至24mmol/L时,会减少与7-MGTP结合的eIF4E和eIF4G,形成的eIF4F减少,mTORC1信号通路中与细胞增殖相关的4EBP1和与细胞生存相关的Akt的磷酸化减弱,与蛋白质翻译起始过程有关蛋白分子的表达下降,抑制蛋白质翻译起始过程,抑制成纤维细胞的增殖(P<0.05),促进成纤维细胞的凋亡(P<0.05),细胞周期被阻滞在G1期。结论:一定范围内增加葡萄糖和亮氨酸的浓度会活化细胞内mTORC1信号通路,促进小鼠皮肤成纤维细胞生长,可是当同时增加葡萄糖和亮氨基酸的浓度却会通过过度活化mTORC1/S6K1反馈抑制成纤维细胞生长。
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