【摘 要】
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目的:1、探究胃癌患者血浆外泌体PD-L1（ePD-L1）是否与疾病发展程度相关。2、探究胃癌患者血浆ePD-L1是否能够抑制T细胞活化。方法:1、使用外泌体纯化试剂纯化胃癌患者血浆中的外泌体。2、利用纳米粒子跟踪分析（NTA）技术和NanoSight NS300颗粒跟踪分析仪分析囊泡的数量以及大小;电镜观察外泌体超微结构;共聚焦荧光显微镜观察外泌体颗粒上特异标记的CD63和PD-L1抗原。3、利
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目的:1、探究胃癌患者血浆外泌体PD-L1（ePD-L1）是否与疾病发展程度相关。2、探究胃癌患者血浆ePD-L1是否能够抑制T细胞活化。方法:1、使用外泌体纯化试剂纯化胃癌患者血浆中的外泌体。2、利用纳米粒子跟踪分析（NTA）技术和NanoSight NS300颗粒跟踪分析仪分析囊泡的数量以及大小;电镜观察外泌体超微结构;共聚焦荧光显微镜观察外泌体颗粒上特异标记的CD63和PD-L1抗原。3、利用ELISA对血浆ePD-L1进行定量检测,分析ePD-L1水平与癌症发展相关性。4、将CD8+T细胞与不同PD-L1水平的外泌体共孵育,利用流式细胞术检测PD-L1水平对CD8+T细胞表面CD69、PD-1的表达以及对TNFα、IFNγ含量的影响。结果:1、外泌体颗粒的电镜观察结果显示我们成功分离到有双层膜结构的外泌体。2、从肿瘤患者血浆中提取到的外泌体颗粒大小明显大于从正常人血浆中提取到的外泌体颗粒。3、利用共聚焦荧光观察了CD63和PD-L1在外泌体表面分布情况,通过肉眼观察可以发现患者血浆的PD-L1+外泌体明显多于对照。4、利用ELISA检测了30名患者和30名正常人血浆样品中的ePD-L1含量,检测结果显示癌症患者血浆ePD-L1的含量显著高于正常人血浆ePD-L1含量（P<0.01）。根据病例中肿瘤的TNM分期将30名患者分为3/4期（高分期）和1/2期（低分期）两组,将两组血浆样品中检测到的ePD-L1含量进行统计学分析,结果显示高分期的患者血浆ePD-L1明显高于低分期的患者（P<0.05）。根据病例信息中患者性别不同将30名患者分为两组,并对两组血浆样品中检测到的ePD-L1含量进行统计学分析,结果表明不同性别患者血浆ePD-L1的含量没有显著差异（P>0.05）。5、使用表达PD-L1的外泌体样品与CD8+T细胞共同孵育后,利用流式细胞术进行检测。结果显示,CD8+T细胞上CD69的表达、TNFα和IFNγ的含量明显降低（P<0.01）,而PD-1表达情况无明显变化（P>0.05）;使用不同PD-L1含量外泌体样品处理T细胞而后进行流式细胞术检测发现,比起PD-L1低表达的外泌体,PD-L1高表达的外泌体能够更强抑制CD8+T细胞上CD69的表达、TNFα和IFNγ的含量（P<0.05）,但PD-L1低表达和高表达的外泌体对PD-1表达造成的差异不显著（P>0.05）。结论:1、癌症患者血浆ePD-L1的水平显著高于正常人血浆ePD-L1水平,并且癌症患者血浆ePD-L1的水平与癌症分期呈正相关。2、胃癌患者血浆ePD-L1对CD8+T细胞的活化有显著的抑制作用。肿瘤细胞可能通过释放PD-L1+外泌体抑制T细胞的活化来抵抗免疫系统的抗肿瘤作用。
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