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目的:建立高氧损伤肺泡上皮细胞模型,通过观察细胞形态、凋亡变化,SIRT1蛋白转位情况,SENP1蛋白及乙酰化P53蛋白表达变化,探讨SIRT1蛋白在肺泡上皮细胞高氧损伤中的意义,以及SIRT1转位抑制剂莱普霉素B对肺泡上皮细胞高氧损伤的保护作用。方法:该实验将体外传代培养的人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)作为实验的研究对象。运用高体积分数氧诱导人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)损伤模型为基础,即给模型组以3L/min的速度通入含900 ml/L O2和50ml/LCO2高纯混合气。将传代培养后的肺泡上皮细胞(HPAEpiC)随机的分为3组,包括对照组、高氧组和高氧+莱普霉素B组。对照组:向对照组细胞内加入DMEM高糖培养基,此培养基是含有10%胎牛血清与1%青链霉素,加入培养基后将细胞培养在温度为37℃、湿度为5%的CO2培养箱中。高氧组:加入相同培养基后高氧处理细胞即以3L/min的速度往细胞内通入含有900 ml/L O2和50ml/LCO2高度纯合的混合气,处理时间为10min,处理完毕后放入CO2培养箱中培养。高氧+莱普霉素B组:加入相同的培养基后,加入终浓度为5ng/ml的莱普霉素B,然后以相同的速度通入相同的混合气,同样处理时间为10min,处理完毕后放入CO2培养箱中培养。待细胞培养至12h、24h及48h后,将细胞收集好后检测的指标是:(1)各组细胞形态学的改变使用倒置相差显微镜观察并给予拍照;(2)流式细胞凋亡技术分别检测对照组、高氧组和高氧+莱普霉素B组分组培养24h后的细胞凋亡率;(3)采用免疫荧光检测分组培养24h后对照组、高氧组和高氧+莱普霉素B组SIRT1蛋白的转位;(4)细胞培养24h后采用Western Blot检测以上三组细胞的SENP1蛋白和乙酰化P53lys(382)蛋白的表达。结果:(1)倒置相差显微镜下可以观察到对照组的细胞生长情况好,贴壁较好,分布均匀,大多数的细胞形态呈现的是长梭形或多角形,细胞与细胞间的间距小,培养液中观察可见悬浮的细胞少。高氧组的细胞贴壁较差,生长情况较差,大多数的细胞形态发生了改变,变成了圆形或椭圆形,培养液中观察可见悬浮的细胞较多,细胞与细胞间的间距增大。与高氧组相比高氧+莱普霉素B组的细胞生长情况较好,大多数的细胞形态呈现的是长梭形或多角形,贴壁状况较好,培养液中观察可见悬浮的细胞减少,但较对照组稍差。(2)流式细胞凋亡结果示:高氧组细胞凋亡率显著高于高氧+莱普霉素B组和对照组(P<0.05);对照组凋亡率最低,三组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)(3)免疫荧光结果显示:细胞核呈现蓝色荧光,SIRT1蛋白呈现红色荧光,融合荧光呈紫色。对照组细胞红色荧光集中在细胞核,高氧组红色荧光在细胞核及细胞质均有分布,且较对照组,细胞质的红色荧光明显,转位细胞较对照组增多,差异有显著性(P<0.05),但高氧+莱普霉素B组转位细胞率高于对照组,但低于高氧组,差异具有显著性(P<0.05)。(4)与对照组相比,高氧组细胞处理24h后HPAEpiC细胞内SENP1蛋白的表达相对于对照组来说偏高,结果具有统计学意义(P<0.05)。处理24h后高氧组细胞内乙酰化P53蛋白的表达高于对照组及高氧+莱普霉素B组的表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。高氧+莱普霉素B组乙酰化P53蛋白的表达高于对照组,但低于高氧组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:SIRT1作为抗氧化应激的重要蛋白参与了高氧诱导的肺泡上皮细胞凋亡及肺损伤。SIRT1介导肺泡上皮细胞凋亡的机制是肺泡上皮细胞暴露于高氧后,促使SENP1蛋白表达增多,从而使SIRT1蛋白发生去SUMO化增多,从而促使SIRT1发生核-浆穿梭,通过调解下游的P53蛋白而介导细胞凋亡。莱普霉素B可以减轻高氧肺损伤。