本论文主要是对葫芦科植物种子中两种新型的小分子量核糖体失活蛋白的分离、纯化和性质进行了研究。（一）栝楼种子中一种新型小分子核糖体失活蛋白—S-trichokirin的分离、纯化和性质 S-trichokirin是我们首先从栝楼（Trichosanthes kirilowii）种子中通过硫酸铵分级沉淀、Cellulose CM-52阳离子交换层析、SephacrylS-100凝胶过滤和FPLC Mono-S阳离子交换层析纯化到的一种新型核糖体失活蛋白，反相HPLC及质谱分析验证了它为单一蛋白，其得率约为0.4mg/100g脱脂种子干粉。经15％SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和15％Tris-Tricine聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，其分子量为8kD左右。通过13.5％酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，S-trichokirin的等电点在pH9.5左右，是一种强碱性蛋白质。S-trichokirin对鼠肝核糖体作用的研究结果表明，其失活核糖体的机制与trichosanthin一致，属于RNA N-糖苷酶催化型。S-trichokirin具有较强的抑制兔网织红细胞裂解液蛋白质生物合成的能力，蛋白质生物合成抑制50％时的浓度(IC50)为1.15×10-10mol/L。 （二）丝瓜籽中小分子核糖体失活蛋白—Luffin S2的分离、纯化和性质 Luffin S2是从丝瓜（Luffa cylindrica）籽中经硫酸铵分级沉淀、Cellulose CM-52阳离子交换层析、Sephadex G-25脱盐、FPLC Mono-S离子交换层析得到的另一种新型小分子量核糖体失活蛋白，得率约为1.5mg/100g脱脂种子干粉，经15％SDS-PAGE测定，其分子量为 摘 要 8 kD左右。Luffin S。对兔网织红细胞裂解液的蛋白质生物合成有较强 的扣制左右，其 IC习＊为 1．50X 10’＊mol／L，毒性与 S一trichokirin相当口 利用纯化的 Luffin S。免疫小鼠，制得了 Luffin S。的多克隆抗血 清，它有较高的效价，但专一性不够强。进而利用细胞融合技术，初 步筛选到一株分泌抗Luffin S。单抗的杂交瘤细胞株，其培液上清有较 强的专一性，已用于LllffiflS。的WCStCfttBIOttiflg检狈肌 利用蛋白质测序仪测定了 Luffin S。N－端 9个氨基酸的序列，并据 此设计5，端简井引物，用此引物和 3’－端通用引物，通过RTFCR技 术克隆了 Luffin S。的部分cDNA序列。测序表明，克隆到的Luffin S。 。DNA由 198个碱基的编码序列和 3’－端 87个非编码序列组成，根据 Luffin S。cDNA的编码序列推断，Luffin S。山 66个氦基酸组成，分子 量为 7，852道尔顿，这与天然 Luffin S。的测定结果一致。另外，我们 还构建了 Luffin S。的表达质粒 pET28a叱什侣。，摸索了此质粒在大肠。杆菌中的表达条件，结果表明，rurnn s。的表达量甚微，但通过 ELISA检测和纯化产物切割rRNA的活力检测，验证了表达产物。－h有 重组 Luffin S。的存在。 S－trichokirin和 Luffin S。是我们首先发现的有别于普通的单链和 双链核糖体失活蛋白的一类新型小分于量核糖体失活蛋臼，由于其分 于量仅为常规单链核糖体失活蛋白的可 1／3～l／4左右，因此它们是研 究核糖体的结构与功能、蛋白质与核酸相互作用关系的理想材料。同 时作为免疫毒素的“弹头”，它们也将会有很好的应用前景，并为今 后转基因植物的研究提供更多的选择。