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目的:以龙利叶SauropusrostratusMiq.的茎为研究对象,通过对其生药鉴别、理化鉴别的研究,建立对广西产龙利叶茎的HPLC指纹图谱分析方法,为后续的质量标准研究提供科学依据。对其水提液的急性毒性和对急性炎症的抗炎作用进行了药效学研究,为临床药用和开发利用药用资源提供前期的基础科学研究。
方法:
(1)采用显微鉴别对龙利叶茎进行生药鉴定研究。
(2)采用化学系统试验的方法对龙利叶茎中可能存在的成分进行化学试验。
(3)采用薄层色谱法对龙利叶茎进行定性鉴别的研究。
(4)采用紫外-可见分光光度法(UV-vis法)分别对其95%乙醇、水、甲醇、乙酸乙酯、氯仿、石油醚提取液进行光谱鉴别的研究。
(5)采用红外光谱法对10批不同产地的龙利叶茎药材粉末及浸膏进行光谱定性鉴别。
(6)按照《中国药典》2010年版一部附录中提供方法,进行龙利叶茎药材水分、灰分、浸出物等检测指标的限量研究。
(7)采用HPLC法对广西不同产地的龙利叶茎进行指纹图谱分析,建立广西产龙利叶茎的HPLC指纹图谱。
(8)采用改良寇氏法对龙利叶茎的水提取物进行了急性毒性试验,测定其半数致死量。
(9)采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响及小鼠棉球肉芽肿等模型,观察龙利叶茎水提液抗炎作用。
结果:
(1)龙利叶的茎主要显微特征是:①木栓层由7~12列细胞,皮层中含有很多淀粉粒,并含有纤维束,韧皮部狭窄,木质部宽,射线明显,髓部大;②粉末可见网纹、螺纹及梯纹导管、伴有含草酸钙簇晶薄壁细胞,淀粉粒较小,并有纤维等。
(2)系统化学预试实验表明,龙利叶茎药材中可能含有蛋白质,氨基酸和多肽,苷类和皂苷,有机酸类,糖类,香豆素和内酯,生物碱等化学成分。
(3)薄层定性鉴别中,用三种不同展开系统展开得到的斑点均与对照药材有较好的对应,且三种展开分离效果都较好。
(4)龙利叶茎药材不同溶剂的提取液在紫外-可见光区都有特有的吸收峰,特别是石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙醇提取液的特征吸收峰较多、较强。这些特征均具有一定的鉴别意义。
(5)10批龙利叶茎药材粉末及浸膏的红外光谱图相关系数都在0.8以上。从整体面貌辅助鉴定龙利叶茎药材的真实性、优良性和稳定性。
(6)根据水分、灰分、炽灼残渣及浸出物测定,拟规定龙利叶茎的水分含量不高于9.53%;总灰分含量不高于8.69%;酸不溶性灰分含量不高于0.3%;炽灼残渣含量不高于13.05%,龙利叶茎的浸出物含量不低于13.96%。
(7)建立广西龙利叶茎HPLC指纹图谱:检测波长为280nm,梯度洗脱,在65min内记录药材的指纹图谱。HPLC指纹图谱标定了14个共有峰。10批龙利叶茎药材指纹图谱相似度较好,各批药材与对照指纹图谱间的相似度均在0.8以上。
(8)龙利叶茎水提物的LD50为160.55g/kg,LD5095%的可信限155.2~166.07g/kg。
(9)龙利叶茎水提液的高剂量对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和小鼠棉球肉芽肿有明显的抑制,能降低醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性,中剂量和低剂量对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀及小鼠棉球肉芽肿有抑制作用,但是降低醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的作用不明显,说明龙利叶茎的水提液有一定的抗炎作用。
结论:①对广西产龙利叶茎进行生药显微鉴定、理化鉴别、化学预实验和光谱鉴别研究,均对龙利叶茎药材具有鉴别意义。②HPLC指纹图谱的建立,初步为龙利叶茎药材的质量标准的制定提供参考。③龙利叶茎的水提液有一定的毒性,有一定的抗炎作用。其药效学研究为临床开发利用龙利叶茎提供了前期的基础研究。