论文部分内容阅读
晚期糖基化终产物(Advanced glycation end products,AGEs)是还原糖和蛋白质、多肽或氨基酸等的游离氨基通过美拉德反应等途径生成的一系列结构复杂的化合物,其中羧甲基赖氨酸(N?-(carboxymethyl)lysine,CML)作为其中典型的物质被广泛研究。CML可由体内合成,或通过食物摄入。大量研究表明,CML在体内的累积与阿尔茨海默症等的发生密切相关。学习记忆能力的减退是阿尔茨海默症等疾病的主要症状之一,亦被证明与体内CML的累积具有重要联系。然而,外源特别是膳食来源的CML对学习记忆能力的影响研究较少,因此,本文研究了普通饲料和高脂饲料喂养条件下长期灌胃CML对大鼠脑中结合态CML富积的影响以及从个体(行为学)、细胞(组织切片)和分子(CML累积和神经递质的释放)三个水平考察食源性CML对大鼠学习记忆能力的影响。首先针对普通饲料和高脂饲料喂养大鼠,以60 mg/kg·d灌胃CML 12周,考察不同饮食条件对CML在大鼠脑组织中蓄积的影响。结果显示,建立的CML测定方法中,CML在82.43~2637.50 ng/m L浓度范围内线性关系良好,相关系数大于0.9996;检测限为13.10 ng/m L(LOD,S/N=3),定量限为44.93 ng/m L(LOD,S/N=10);样品中添加100,200和300ng/m L浓度水平的回收率为92.0%~115.4%,相对标准偏差为4.39%~11.91%。普通饲料组、普通饲料+CML组、高脂饲料组、高脂饲料+CML组大鼠脑中CML的含量分别为6.59±1.23μg/g、11.35±1.43μg/g、13.80±3.31μg/g、38.99±5.83μg/g,同样饮食条件下灌胃CML的大鼠脑中CML含量均显著(P<0.05)高于未灌胃大鼠,且高脂饮食能加速大鼠脑中CML的蓄积。将不同剂量CML(低剂量组1.5 g CML/kg饲料,中剂量组4.5 g CML/kg饲料,高剂量组13.5 g CML/kg饲料)与普通饲料混合喂养大鼠5周后分别进行水迷宫实验,取海马组织HE染色并观察其病理形态,同时测定脑组织中CML以及海马、纹状体、前额叶中神经递质的水平。在水迷宫定位航行实验中,高剂量组大鼠逃避潜伏期显著(P<0.05)低于对照和中低剂量组;在水迷宫空间探索实验中,高剂量组大鼠穿越平台次数及在平台所在象限逗留距离显著(P<0.05)少于其他三组。海马切片显示低剂量组大鼠海马齿状回细胞核肿胀,少部分细胞核固缩;中剂量组海马细胞核固缩程度加深;高剂量组海马细胞核固缩,核周空晕明显。大鼠脑中CML水平随摄入CML剂量增加而升高,且每两组之间均有显著性差异(P<0.05)。CML的摄入会降低海马中谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸、D-丝氨酸、去甲肾上腺素、组胺、乙酰胆碱的释放,增加酪氨酸的释放;CML的摄入会降低纹状体中去甲肾上腺素、组胺、乙酰胆碱的释放,增加色氨酸的释放,而对谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸、D-丝氨酸、酪氨酸无影响;CML的摄入会增加前额叶中甘氨酸、γ-氨基丁酸、去甲肾上腺素、组胺的释放,降低乙酰胆碱、谷氨酸、天冬氨酸的释放,对D-丝氨酸、色氨酸、酪氨酸的释放无影响。研究结果表明膳食摄入一定剂量的CML能对大鼠的学习记忆能力造成一定程度的损伤,同时会导致相关神经递质释放的紊乱。