【摘 要】
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为探究Ce诱导东北红豆杉细胞次生代谢过程中信号如何传递到细胞核内并作用于次生代谢相关的基因,以及ERK在次生代谢相关酶激活过程中的介导作用,系统研究了Ce对ERK的诱导效应以及ERK的磷酸化对紫杉二烯合成酶基因转录、苯丙氨酸解氨酶和脂氧合酶酶活的影响.结果如下:1.通过Western杂交方法检测了1mM Ce对红豆杉细胞ERK的激活效应,结果表明1mM Ce能快速诱导ERK的磷酸化,在1h激酶活性
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为探究Ce<4+>诱导东北红豆杉细胞次生代谢过程中信号如何传递到细胞核内并作用于次生代谢相关的基因,以及ERK在次生代谢相关酶激活过程中的介导作用,系统研究了Ce<4+>对ERK的诱导效应以及ERK的磷酸化对紫杉二烯合成酶基因转录、苯丙氨酸解氨酶和脂氧合酶酶活的影响.结果如下:
1.通过Western杂交方法检测了1mM Ce<4+>对红豆杉细胞ERK的激活效应,结果表明1mM Ce<4+>能快速诱导ERK的磷酸化,在1h激酶活性达到最高.而且不同Ce<4+>浓度的诱导实验表明ERK的磷酸化与Ce<4+>的诱导存在浓度依赖性.
2.通过添加特异ERK磷酸化的抑制剂PD98059,并进行Western杂交检测,结果表明ERK的磷酸化水平随PD98059浓度的升高而降低,PD98059达到200μM时,ERK磷酸化水平降低到诱导水平的46﹪,对照水平的89﹪.
3.通过半定量RT-PCR的方法分析对照组、诱导组以及抑制组细胞紫杉二烯合成酶基因的转录水平,相关性分析表明紫杉二烯合成酶基因的转录与ERK的磷酸化呈正相关.
4.分光光度法检测对照组、诱导组和抑制组细胞苯丙氨酸解氨酶和脂氧合酶的活性,表明苯丙氨酸解氨酶和脂氧合酶的活性与ERK的活性密切相关.
综上所述,ERK的磷酸化在Ce<4+>诱导红豆杉细胞的次生代谢过程中扮演着重要的信号传递角色.
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