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目的:肾素-血管紧张素-醛固酮系统（Renin-Angiotensin-Aldosterone System,RAAS）的激活与房颤（Atrial Fibrillation,AF）的发生密切相关,是导致心房电重构和结构重构的作用机制之一。而小电导钙激活钾通道（Small conductance calcium-activated potassium channels,SK通道）尤其是SK2作为SK通道中最重要的亚型与房颤的发生和发展密切相关。研究表明在快速起搏的犬模型上,SK通道的阻滞剂NS8593显著降低AF的发生率和房颤持续时间。本课题组前期结果也表明,在快速起搏的犬模型上,快速起搏组（pacing组）血清及左房组织血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）浓度升高,pacing+AngⅡ组房颤的诱发率也明显增加,而pacing+AngⅡ+缬沙坦（Valsartan）组可明显抑制这一作用,SK通道阻断剂NS8593可明显抑制pacing+AngⅡ组房颤的诱发率和持续时间。因此推测AngⅡ可能通过影响SK2通道来参与房颤的发生发展,但其分子机制还不清楚。方法:（1）检测AngⅡ对大鼠心房组织及细胞SK2通道基因和蛋白的表达变化:（1）采用微量渗透压泵的方式泵入AngⅡ（200ng/kg/min,持续14天）,建立AngⅡ慢性处理的大鼠模型,14天后取出心房组织,用qRT-PCR检测KCNN2基因的表达,用Western blotting技术检测SK2蛋白的表达变化;（2）采用胰蛋白酶联合Ⅱ型胶原酶的方法分离乳大鼠心房肌细胞,并随机分为control组、1.5μM AngⅡ组、1.5μM AngⅡ+10μM Valsartan（AngⅡ 1型受体阻滞剂）组、1.5μM AngⅡ+10μM PD123319（AngⅡ 2型受体阻滞剂）组,处理72h后分别用qRT-PCR及Western blotting检测SK2基因和蛋白表达的变化;（2）生物素法提取膜蛋白检测Ang Ⅱ对乳鼠心房肌细胞膜上SK2通道蛋白以及表达在HEK293T细胞系上的SK2通道膜蛋白的影响。（3）免疫共沉淀法检测表达在HEK293T细胞系上SK2通道蛋白与AT1R或AT2R之间的相互作用关系。（4）细胞免疫荧光结合全内反射成像技术检测AngⅡ对乳鼠心房肌细胞上SK2通道蛋白转运的影响。（5）流式细胞术检测AngⅡ对表达在HEK293T细胞系上的SK2通道蛋白转运的影响。（6）通过全细胞膜片钳技术检测AngⅡ（1.5uM）对单独表达SK2、共表达SK2+AT1R和共表达SK2+AT2R的细胞系CHOK1-SK2-GFP上的SK2通道电流幅度的差异。结果:（1）AngⅡ增加大鼠心房组织和心房肌细胞SK2通道基因和蛋白的表达:（1）AngⅡ增加SD大鼠心房组织KCNN2基因的表达（n=7,P<0.05）,同时也明显增加SK2通道总蛋白的表达（n=7,P<0.01）;（2）1.5μM AngⅡ增加乳大鼠心房肌细胞KCNN2通道基因的表达（n=5,P<0.01）,且10μM Valsartan可抑制这一效应（n=5,P<0.01）;1.5μM AngⅡ上调乳鼠心房肌细胞SK2通道蛋白的表达（n=5,P<0.01）,同样可被10μM Valsartan所逆转（n=5,P<0.01）;（2）AngⅡ增加SK2通道膜蛋白的表达:（1）1.5μM AngⅡ增加乳鼠心房肌组织SK2通道膜蛋白的表达（n=6,P<0.01）,且可被10μM Valsartan所逆转（n=5,P<0.05）。（2）在SK2和AT1R共表达的HEK293T细胞系上,1.5μM AngⅡ增加SK2通道膜蛋白的表达（n=5,P<0.05）;而在SK2和AT2R共表达的HEK293T细胞系上,1.5μM AngⅡ并不引起SK2通道膜蛋白的增加（n=4,P>0.05）。（3）SK2与AT1R之间存在蛋白间相互作用:在共表达SK2和AT1R或共表达SK2和AT2R的HEK293T细胞系上,通过免疫共沉淀检测SK2与AT1R/AT2R之间的相互作用发现SK2与AT1R之间存在蛋白间相互作用,而SK2与AT2R之间的相互作用不明显。（4）1.5μM AngⅡ促进SK2通道向膜上转运:（1）1.5μM AngⅡ促进乳鼠心房肌细胞上SK2通道蛋白的转运;（2）在共表达SK2和AT1R的HEK293T细胞中,1.5μM AngⅡ可促进SK2向膜上的转运（n=3,P<0.01）;而在共表达SK2和AT2R的HEK293T细胞中,1.5μM AngⅡ对SK2蛋白向膜上的转运没有明显的影响（n=3,P>0.05）;在单独表达SK2的HEK293T细胞中,1.5μM AngⅡ对SK2向膜上的转运也没有明显的影响（n=3,P>0.05）。（5）AngⅡ对SK2通道电流幅度的影响:（1）1.5μM AngⅡ可增加转染了AT1R的CHOK1-SK2-GFP细胞系上的SK2通道电流幅度;（2）1.5μM AngⅡ对转染了AT2R的CHOK1-SK2-GFP细胞系上的SK2通道电流幅度没有明显的影响;（3）1.5μM AngⅡ对没有转染受体的CHOK1-SK2-GFP细胞系中的SK2通道电流幅度也没有明显影响。结论:RAAS激活与房颤的发生密切相关,AngⅡ可通过AT1受体增加SK2通道蛋白向膜上转运,表现为ISK增加。AngⅡ上调SK2通道参与了心房电重构过程,这可能是房颤发生和维持的机制之一。