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目的研究hsa-miR-181a在急性淋巴细胞白血病中的表达情况及与细胞凋亡通路中靶基因的表达关系,并探索其在ALL的初发、缓解和复发阶段中的作用,为ALL的治疗提供新的实验依据。方法Taqman探针荧光定量PCR法检测体外培养的4种急性淋巴细胞系白血病细胞株、36例ALL患者和23例非恶性血液病骨髓标本中hsa-miR-181a的表达水平,分析其在不同的临床阶段(初治、缓解和复发)表达差异性的临床意义;收集整理ALL患者的临床症状、体征、实验室检查结果、临床诊断、治疗和预后和生存情况,进行统计学分析;构建hsa-miR-181a慢病毒载体,与包装质粒共转染293T细胞,产生高滴度病毒颗粒,感染Nalm-6细胞,获得稳定过表达hsa-mi R-181a的细胞模型,扩孔传代;CCK-8法观察过表达前后Nalm-6细胞增殖情况;Real-time PCR检测过表达前后凋亡相关靶基因Bcl-2的表达水平;Western-blot检测过表达前后Bcl-2、caspase-3及caspase-9蛋白的表达变化。结果1初治、缓解与复发三组中,hsa-miR-181a相对表达量最高的为复发组(5.353±4.491),其次为初治组(2.332±2.706),最低为缓解组(0.461±0.629)。复发组中hsa-miR-181a的表达量高于初治组和缓解组,差异具有统计学意义(P<0.05)。hsa-miR-181a相对表达量与血红蛋白量成反比关系,标准系数为-0.434,决定系数R2=0.188,差异具有统计学意义(P<0.05)。2构建pGLV3/H1/GFP-hsa-miR-181a-GFP和Puro慢病毒表达载体,通过荧光显微镜观察GFP和Taqman探针荧光定量PCR等方法,验证其可在Nalm-6细胞株中高效表达,且能产生成熟的hsa-miR-181a以发挥生物学作用,用于进一步功能研究。3 CCK-8试验检测过表达hsa-miR-181a对细胞增殖的影响,可以看出,hsa-miR-181a显著抑制Nalm-6细胞的增殖(P<0.05)。Real-time PCR法测定Nalm-6细胞过表达hsa-miR-181a前后Bcl-2的表达,过表达OE组Bcl-2表达明显降低,提示hsa-miR-181a可能通过靶向下调Bcl-2的表达,促进Nalm-6细胞凋亡;Western Blot测定Nalm-6细胞过表达hsa-miR-181a前后Bcl-2、caspase-3与caspase-9蛋白水平的表达,经hsa-mi R-181a过表达后Bcl-2表达减少,cleave-caspase-3与cleave-caspase-9蛋白增多,提示hsa-miR-181a可能促进caspase-3和caspase-9的活化,从而激活caspase系统。结论hsa-miR-181a在ALL初治和复发阶段高表达,过表达的hsa-miR-181a能够抑制ALL细胞增殖,我们推测hsa-miR-181a在ALL高表达与机体的代偿机制有关。本研究为ALL的治疗提供新思路。