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目的:前期研究结果显示,乙酰肝素酶（HPA）能够诱导人胃癌细胞发生上皮间质转化(EMT)从而促进胃癌细胞侵袭转移（文章已投待发表）。但其机制尚未明确。EMT在肿瘤侵袭和转移过程中起重要作用。为此,本实验在前期研究基础上，深入探讨乙酰肝素酶促进人胃癌MGC803细胞发生EMT的机制。 方法：1、选取前期研究建立的高表达HPA的人胃癌细胞系MGC803，命名为MGC803-HPA，采用Western Blot技术验证HPA在人胃癌细胞系MGC803-HPA中高表达。2、采用Western Blot技术检测人胃癌MGC803-HPA细胞中EMT相关转录因子snail和twist以及信号分子WNT-5a蛋白表达水平。3、将购买的靶向snail和WNT-5a的特异性siRNA，采用脂质体转染法分别转染入人胃癌MGC803-HPA细胞，采用荧光定量PCR和Western Blot技术检测干扰效率。4、采用Western Blot技术检测干扰人胃癌MGC803-HPA细胞中snail和WNT-5a表达后上皮标志物E-cadherin和间质标志物Vimentin、N-Cadherin蛋白表达变化。5、相差倒置显微镜观察分别干扰snail和WNT-5a基因后人胃癌MGC803-HPA细胞形态学变化。6、采用Western Blot技术检测干扰snail基因后人胃癌MGC803-HPA细胞中WNT-5a蛋白表达变化以及干扰WNT-5a基因后人胃癌MGC803-HPA细胞中snail蛋白表达变化。7、利用免疫组织化学方法检测91例人胃癌组织中HPA、snail和WNT-5a蛋白表达。 结果：1、Western Blot技术检测人胃癌MGC803-HPA细胞中HPA呈高表达。2、人胃癌MGC803-HPA细胞中Snail和WNT-5a蛋白表达增加，而Twist表达无明显变化。3、经荧光定量PCR和Western Blot技术检测靶向siRNA（snail和WNT-5a）能明显干扰人胃癌MGC803-HPA细胞中snail和WNT-5a mRNA和蛋白的表达。4、Western Blot技术检测结果显示，干扰人胃癌MGC803-HPA细胞中snail和WNT-5a表达后上皮标志物E-cadherin增高，间质标志物Vimentin、N-Cadherin下降。5、相差倒置显微镜观察分别干扰人胃癌MGC803-HPA细胞中snail和WNT-5a表达后细胞由梭形变为立方形。6、Western Blot免疫印迹法检测结果显示，干扰人胃癌MGC803-HPA细胞中snail基因表达后WNT-5a蛋白表达无明显变化；干扰人胃癌MGC803-HPA细胞中WNT-5a基因表达后snail蛋白表达无明显变化。7、免疫组织化学法测定91例人胃癌组织中HPA、snail和WNT-5a蛋白阳性表达率分别为75.82％、70.33%、76.92%。HPA的表达与肿瘤发生部位、肿瘤分化程度以及淋巴结转移情况密切相关（p＜0.05）。Snail的表达与肿瘤分化程度以及淋巴结转移情况密切相关（p＜0.05）。WNT-5a的表达与淋巴结转移情况密切相关（p＜0.05）。在胃癌组织中，HPA和Snail（r=0.254，P=0.011）及Wnt-5a（r=0.239，P=0.023）表达均呈正相关。 结论：乙酰肝素酶可能通过调节转录因子snail和信号分子WNT-5a两种相互独立的因子的表达促进人胃癌细胞发生EMT。