对虾白斑病毒的侵染机制及其特异性单链抗体基因研究

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对虾白斑病毒(WSSV)是对全球对虾养殖业造成巨大经济损失的一种对虾病毒。我国于1993年爆发了白斑病,该病的蔓延使全国对虾总产量减少70%。到目前为止,还没有稳定的传代细胞系能有效的接种和繁殖病毒,致使对虾白斑病毒的研究进展缓慢。特别是病毒的基因功能研究不能深入到细胞水平,使得病毒和宿主的相互关系、病毒感染的分子机理等研究还不明了,且尚未开发出有效的防治药物,导致对该病的防治依然困难。本论文从提纯白斑病毒入手,从这三方面对白斑病毒进行了深入研究:1)对虾的原代细胞培养和病毒对原代细胞的感染,为进一步在细胞水平研究白斑病毒的基因功能打下基础;2)用原核表达的VP28和VP28-EGFP作为材料研究囊膜蛋白VP28的功能(在病毒感染中所起的作用);3)运用噬菌体展示技术,以WSSV为固相靶抗原,筛选能够与白斑病毒特异性结合的噬菌体展示抗体,为今后进一步开发抗病毒药物和检测试剂打下基础。 用15%的胎牛血清、L-15培养基和不同浓度的盐、抗生素等,我们从对虾的类淋巴组织(Oka)取材,成功地培养了原代淋巴细胞。细胞培养瓶放置在28℃培养,可形成70-80%的细胞单层。这种原代细胞可不换培养基维持7天以上。尽管这些原代细胞不能继续传代,但用对虾白斑病毒对它们进行感染试验,能诱导形成明显的细胞病理学变化。由白斑病毒诱导形成的细胞病理学效应(CPE)主要包括细胞聚集成团、然后解离并裂解。用原代淋巴细胞培养体系,我们可以对感染的病毒进行定量分析,利用TCID50法对病毒的效价进行测定,我们所用的病毒其效价为3.23×107TCID50/ml。 我们还测定了在不同浓度的WSSV感染的培养液细胞的成活率,结果证明,WSSV的感染浓度与细胞的成活率呈负相关,即用于感染的细胞浓度越高,细胞
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