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实验在研究过程中,首先建立了烟草中糠醛和氨基酸的高效液相色谱分析方法,方法重现性好,准确度高。然后比较了生物制剂对不同部位、不同陈化时间烟叶中糠醛和氨基酸含量的影响,以此作为判断采用的生物制剂对烟草陈化品质影响的依据之一。
论文主要工作归纳如下:
1.采用乙酸乙酯液液萃取,反相高效液相色谱/紫外检测,外标法定量,成功测定烟叶中的糠醛和5-羟甲基糠醛的含量。色谱柱为SinoChrom ODS-BP,柱温:25℃;流动相:乙腈-1%乙酸(5∶95,v/v),等度洗脱;流速:0.8mL/min;进样量20μL;紫外检测波长280nm;以保留时间定性,外标法定量。5-羟甲基糠醛和糠醛的出峰时间分别为13.28min和17.44min。糠醛和5-羟甲基糠醛的峰面积与浓度呈现良好的线性关系,相关系数都大于0.99,线性范围良好,按信噪比为3的检测限分别为21.2ng/ml,和5.2ng/mL,峰面积的RSD都低于4.19%,回收率范围从88.6%~94.9%。在陈化的过程中,上部、中部和下部烟样中糠醛类物质的总量都有所增加,添加生物制剂的样品增加量显著高于对照,其中上部和中部烟样提升幅度较大,下部烟效果稍差。
2.在本实验室共同研究的基础上对柱前衍生高效液相色谱法测定烟草中游离氨基酸的方法进行了改进。烟草中的17种氨基酸用AQC (6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯)柱前衍生,色谱柱为Waters的AccQ.Tag C18氨基酸专用分析柱,流动相为醋酸盐缓冲溶液和乙腈-水(6∶4,v/v)梯度洗脱,紫外检测波长248nm,柱温35℃,流速1.0mL/min。氨基酸浓度与峰面积呈良好的线性关系,相关系数都大于0.99,回收率85.3%~110.2%,日内和日间相对标准偏差分别低于2.76%和4.58%。结果表明:氨基酸总量表现为中部>上部>下部:在陈化的过程中氨基酸的含量降低;经处理过的中上部烟样陈化一年后其氨基酸总量略高于对照,陈化二年后,上部烟样处理中游离氨基酸总量仍略高于对照,但中下部烟样氨基酸的含量低于对照。