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副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）作为一种猪的上呼吸道病原能引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎,随着世界养猪业的发展,该病已成为全球范围内影响养猪业的一种重要细菌性疾病,给养猪业造成了巨大的损失。临床上灭活苗虽然可以提供一定的保护力,但由于血清型的多样化,使得其免疫保护力很难评价。由于人们对副猪嗜血杆菌的致病机理模糊和保护性抗原成分的不清,制约着新型的疫苗的发展。本研究首次利用反向疫苗学的方法在副猪嗜血杆菌5型中筛选到新的免疫原性外膜蛋白,并进行了其保护性抗原的研究。为研制新型亚单位疫苗研究奠定了重要基础。现将主要的结果报告如下:1.本实验以副猪嗜血杆菌血清5型SH0165为实验材料,利用双向电泳和软件分析建立了其外膜蛋白双向电泳参考图谱。在pH3-10凝胶图谱上,经ImageMasterv6.01程序软件分析显示约85个点,对胶内酶切的点进行MALDI-TOF-MS分析后,鉴定出60种蛋白,其中外膜蛋白有13种。2.利用副猪止血杆菌抗体阴性猪人工感染SH0165获得康复血清,对2D分离的SH0165的外膜蛋白图谱进行Western Blot试验,检测具有潜在免疫原性的蛋白。在Western Blot杂交图谱上共有21个阳性蛋白点,代表了15种蛋白,其中包括在同属细菌中已经被鉴定过的如D15,PalA,OMP P2等等,还包括从未报道过的HPS 06257,Wza等等。所有发现的具有潜在免疫原性的蛋白在副猪嗜血杆菌中均属首次发现。3.我们挑选了其中的免疫原性蛋白D15,在大肠杆菌进行目的基因的克隆,利用构建的表达菌株BL21,对重组蛋白进行了表达纯化。随后在体外利用康复血清进行了反向验证,Western Blot的结果显示D15可以体外识别抗体,证实了该表达纯化蛋白的准确性。4.我们通过预试验测得5LD50（6.5×109）后,利用得到的重组蛋白与弗氏佐剂乳化制备疫苗来免疫小鼠,以检测重组蛋白D15的的免疫保护效果。结果显示:在5 LD50的攻毒剂量下,D15可以提供60%较高的保护力。我们认为D15作为副猪嗜血杆菌新型的亚单位疫苗候选抗原,具有很广阔的开发前景。