佛手,学名Citrus medica L. var. sarcodactylis,为芸香科柑桔属香椽的变种。它不仅是是闻香赏果的花卉珍品,又是传统的名贵中药。我国佛手的主要栽培地区有广东、福建、四川、浙江等,其中浙江金华所产的佛手品质最为优良,为佛手中的上品。但其冬季不抗寒,造成冬季大部分佛手受冻死亡,严重影响佛手的品质和产量。随着现代生物技术的迅猛发展,基因工程为解决这一问题提供了有效的方法和途径。　本试验同时研究了农杆菌介导和基因枪两种遗传转化方法,分别探讨了两种转化方法的影响因素,优化了转化条件,初步建立了佛手农杆菌遗传转化系统,确定了影响基因枪转化效率的几个重要参数利用PCR 技术检测到外源基因（TPS）的导入,利用GUS 报告基因检测到外源基因在抗性愈伤组织中的表达。为遗传转化提供了分子生物学依据。主要结果如下:　1 以佛手叶片为外植体,筛选出适宜佛手再生的基本培养基为MT,以MT 为基本培养基,诱导愈伤组织配方:附加激素为2,4-D 1.5mg·L^-1,NAA 1.0 mg·L^-1,6-BA 0.4 mg·L^-1,诱导频率达98.1%,分化培养基:附加激素6-BA 5mg·L^-1 和IAA 0.5 mg·L^-1。2 通过对叶片预培养时间、侵染时间、共培养时间、抑菌素种类和浓度、延时筛选时间、不同选择压等遗传转化影响因素的研究,建立的佛手遗传转化体系为:叶片黑暗预培养3 天,菌液浓度OD600 为0.6-0.8 的农杆菌中浸染20 分钟,在附加物为L-cys 400 mg·L^-1、AS 100μmol·L^-1 诱导愈伤组织培养基上黑暗共培养3 天,然后转移至附加物为250 mg·L^-1 Cef、250 mg·L^-1 Cb、400 mg·L^-1 L-cys、AS 100μmol·L^-1 黑暗培养2-4 天,再进行Km 100 mg·L^-1 的选择压黑暗培养至抗性愈伤组织出现,转为光照条件下1-2 次的继代筛选,获得抗性芽后,进行扩繁。　3 取幼嫩叶片,用直径为1.0μm 金弹轰击叶片,在轰击距离为6cm,轰击压力为1100psi,真空度26 inches Hg,恢复培养时间为48 小时左右时。GUS 瞬时表达效率最高达17.8%,表达活性也最高。轰击次数对GUS 瞬时表达效率影响不明显。　4 以根癌农杆菌LBA4404 介导TPS 基因转化佛手叶片,获得抗性愈伤组织。对其