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目的初步探讨MLN4924和5-氟尿嘧啶(5-Fu)联合应用以及Smurf1抑制剂单独应用对人结肠癌细胞活力的影响及其发挥作用的可能途径。方法细胞活力实验(MTS法)检测MLN4924和5-Fu单独及联用对HCT116细胞活力的影响;应用中效原理计算两药联合应用的联合指数,判断药物联用的效果;将HCT116细胞分为对照组、MLN4924组、5-Fu组和联合组,各组经相应的药物处理后,Annexin V-FITC/PI双标法上流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹实验(Western blotting)检测各组细胞凋亡相关蛋白Cleaved PARP、Cleaved caspase3的表达水平。MTS法检测Smurf1抑制剂对结肠癌细胞活力的影响;流式细胞术检测不同浓度梯度的Smurf1抑制剂对结肠癌细胞系周期、凋亡的影响;Western blotting检测不同浓度的抑制剂对结肠癌细胞系自噬相关蛋白表达水平的影响。结果随着MLN4924和5-Fu浓度的增加,HCT116细胞活力逐渐降低,0.5μmol/L的MLN4924作用48 h就可以显著地降低HCT116细胞的活力;MLN4924与5-Fu联用时,抑制效果明显强于单药作用(P<0.001),各联合用药组的联合指数均小于1,提示两药联用起协同效果;与对照组相比,单药及联合用药均可显著地促进HCT116细胞的凋亡(P<0.001),且联合用药效果显著优于单独用药(P<0.01);与流式Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡的结果相一致,联合组Cleaved PARP、Cleaved caspase3蛋白表达较对照组及单药组明显升高。相比正常的结肠粘膜上皮细胞,各结肠癌细胞系中Smurf1的表达水平均明显升高。随着Smurf1抑制剂浓度的提升,各结肠癌细胞系的细胞活力逐渐降低;流式细胞术测细胞周期结果显示,随着Smurf1抑制剂B06浓度的升高,细胞周期逐渐停滞于G1期;B06对结肠癌细胞系的凋亡水平无明显影响;B06可使结肠癌细胞的自噬相关蛋白LC-3的表达水平明显升高,呈现出剂量相关性。结论MLN4924与5-Fu通过促进细胞的凋亡而发挥协同抑制人结肠癌HCT116细胞的活力。Smurf1的小分子抑制剂B06可通过促进结肠癌细胞的自噬而抑制结肠癌细胞的活力。