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目的:研究中药灯盏细辛对β-淀粉样蛋白引起的SH-SY5Y神经细胞α7神经型尼古丁受体亚单位在蛋白水平降低的拮抗作用,并探讨该中药对β-淀粉样蛋白引起的SH-SY5Y神经细胞损伤及氧化应激作用的影响,筛选出灯盏细辛在类阿尔茨海默病细胞模型中具有神经保护作用的有效化学成分。 方法:将SH-SY5Y神经细胞进行分组诱导处理,即:正常对照组、β-淀粉样蛋白处理组、单纯灯盏细辛处理组、灯盏细辛联合β-淀粉样蛋白处理组;两类灯盏细辛提取物:一类是灯盏细辛经乙醇提取、乙酸乙酯萃取、再以反相硅胶柱分离等方式提取得到的高、中、低极性组分,另一类是对灯盏细辛经乙醇提取的乙酸乙酯部位进行化学分离,并运用现代波谱技术进行结构鉴定得到的8种化合物;分别用这两类不同的灯盏细辛提取物处理培养细胞;用MTT法检测各处理组细胞成活率;Western blotting方法测定α7神经型尼古丁受体亚单位在蛋白水平的表达;TBA比色法和黄嘌呤氧化酶法分别测定脂质过氧化产物丙二醛水平和超氧化物歧化酶活性。测定结果用单因素方差分析或成组设计资料的检验方法进行统计。 结果:灯盏细辛醇提乙酸乙酯部位经反相硅胶柱分离的中、低极性组分能够对抗β-淀粉样蛋白引起的MTT还原率降低和氧化应激水平升高,上调SH-SY5Y神经细胞α7神经型尼古丁受体亚单位蛋白水平;灯盏细辛醇提乙酸乙酯部位分离出的化学成分,如黄酮类化合物(灯盏乙素、灯盏甲素)、双咖啡酰类化合物(4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-0-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-0-二咖啡酰基奎宁酸)、绿原酸、灯盏花苷等均能显著上调α7神经型尼古丁受体亚单位蛋白水平并呈剂量依赖性,并能对抗β-淀粉样蛋白引起的α7神经型尼古丁受体亚单位蛋白水平降低,同时能减弱β-淀粉样蛋白引起的细胞损伤和氧化水平升高;而飞蓬苷无明显影响。 结论:灯盏细辛提取物中黄酮类化合物、双咖啡酰类化合物、绿原酸及灯盏花苷能对抗β-淀粉样蛋白引起的细胞毒性作用,具有一定的神经保护效应,其机制可能与上调α7神经型尼古丁受体和抗氧化水平有关。