【摘 要】
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背景:Klotho是于1997年发现的一种蛋白,除了抗衰老外还具有抗氧化应激、抗肿瘤和抗炎等特性,巨噬细胞是炎症免疫反应的重要组成部分,它的免疫反应是由M1和M2两种主要表型介导的,而NF-κB在炎性反应中有着至关重要及不可忽略的作用。但Klotho是否通过NF-κB信号通路对巨噬细胞的极化产生影响尚未见报道。目的:利用LPS诱导的巨噬细胞细胞极化模型,探讨Klotho对RAW264.7细胞极化的
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背景:Klotho是于1997年发现的一种蛋白,除了抗衰老外还具有抗氧化应激、抗肿瘤和抗炎等特性,巨噬细胞是炎症免疫反应的重要组成部分,它的免疫反应是由M1和M2两种主要表型介导的,而NF-κB在炎性反应中有着至关重要及不可忽略的作用。但Klotho是否通过NF-κB信号通路对巨噬细胞的极化产生影响尚未见报道。目的:利用LPS诱导的巨噬细胞细胞极化模型,探讨Klotho对RAW264.7细胞极化的影响,明确其机制是否与NF-κB信号通路相关。方法:将RAW264.7细胞分为对照组和实验组（Klotho浓度200,400,600,800,1200,1800,2400,3000,3600,4200,4800pm/L）,培养24h后,CCK-8法检测药物毒性。筛选出合适的药物浓度后,使用LPS（1μg/m L）刺激RAW264.7细胞,诱导细胞极化模型。将细胞分为Control组、LPS组以及LPS+Klotho（200,400,600pm/L）组,进行以下实验。RAW264.7细胞使用Klotho和LPS共同培养12h后,RT-PCR法检测细胞内M1型相关因子i NOS、TNF-α、IL-6I、L-1β以及M2型相关因子Arg-1,IL-10 m RNA的表达水平。RAW264.7细胞Klotho和LPS共同培养24h后,WB法检测细胞内p-NF-κB-p65,M1型相关因子i NOS、TNF-α、IL-6以及IL-1β以及M2型相关因子Arg-1的蛋白表达水平。ELISA法对细胞上清液中IL-1β,IL-10的含量进行检测。NF-κB低表达后WB法检测细胞内p-NF-κB-p65,M1型相关因子i NOS、TNF-α、IL-6以及IL-1β以及M2型相关因子Arg-1的蛋白表达水平。结果:1.CCK-8结果显示,Klotho浓度200pm/L-800pm/L时给药不影响细胞的生长和活力,即对细胞无药物毒性。2.RT-PCR结果表明,LPS+Klotho组m RNA与LPS组相比RAW264.7细胞内M1型相关因子m RNA的表达明显降低,M2型相关因子m RNA的表达明显升高。3.WB结果表明,LPS+Klotho组与LPS组相比Klotho抑制了细胞内NF-κBp65的磷酸化,RAW264.7细胞内M1型相关因子的蛋白表达明显降低,M2型相关因子的蛋白表达明显升高。4.ELISA结果表明,LPS+Klotho组与LPS组相比,Klotho使上清液中M1型相关因子的蛋白表达明显降低,M2型相关因子的蛋白表达明显升高。5.NF-κB低表达后,WB结果表明,与LPS组相比,LPS+JSH-23组和LPS+Klotho+JSH-23组RAW264.7细胞内p-NF-κB-p65和M1型相关因子蛋白的表达明显降低,M2型相关因子蛋白的表达明显升高,而LPS+Klotho+JSH-23组与LPS+JSH-23组相比,Klotho明显降低M1型相关因子蛋白的表达,升高M2型相关因子蛋白的表达。结论:Klotho抑制LPS诱导的RAW264.7细胞内M1型相关因子的表达,促进M2型相关因子的表达。Klotho可能通过抑制NF-κB磷酸化,从而对M1,M2型相关因子的表达产生影响。
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