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研究背景近年来，有研究表明脾酪氨酸激酶（Syk）在类风湿关节炎发病机制中发挥着重要作用，抑制Syk的激活，可以阻断RA发病过程中的炎症连锁反应，为RA的治疗提供新的途径，于是，Syk成为了人们研究RA药物治疗的新靶点。华东理工大学药学院发现了一种小分子化合物HL131012对Syk活性具有较强的抑制作用，进一步采用传统药物化学结构修饰，进行一系列结构优化，合成了一些相关衍生物，通过激酶抑制活性测试，初步筛选出5种抑制作用较好的小分子化合物，为进一步研究它们在细胞水平对Syk的抑制作用，并筛选出抑制Syk生物学活性较好的小分子化合物，与我们合作，进行本课题的研究。目的观察小分子Syk抑制化合物对RA成纤维滑膜细胞增殖及释放炎性因子IL-6，MMP-3的影响，通过与阳性药物R406进行对比，筛选出生物学活性较好的小分子Syk抑制化合物，下一步深入研究其对RA的作用效果，为今后开发治疗RA的药物提供参考价值。方法MTT比色法测定小分子Syk抑制化合物和阳性药物在24h、48h、72h对RA FLS增殖的半数抑制浓度（IC50），比较分析对RAFLS增殖抑制效果较好的小分子化合物；酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测小分子Syk抑制化合物和阳性药物对RAFLS分泌IL-6、MMP-3的影响，比较分析抑制RAFLS分泌IL-6，MMP-3效果较好的小分子化合物。统计学处理：所有数据均采用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。计量资料用均数±标准差（±S）表示；多组间均数的比较采用单因素方差分析及SNK-q检验，检验标准P=0.01，P<0.01表示差异有统计学意义。结果1．当细胞培养至第三代时，普通光镜观察成纤维滑膜细胞生长形态均一，胞体呈长梭形，伸出突起；FCM检测细胞CD90阳性，CD68阴性，符合成纤维滑膜细胞的典型形态学特征。2. MTT结果显示对RA FLS作用24小时后，HL131078的IC50（μmol/L）为（16.30±1.739），与阳性药物IC50（μmol/L）（28.02±1.611）比较，差异有统计学意义（P<0.01）；对RAFLS作用48小时后，HL131012、HL131074、HL131078、HL131087的IC50（μmol/L）值分别为18.44±0.788，21.08±2.033，11.17±0.858，22.17±1.783，与阳性药物IC50（μmol/L）（26.71±1.859）比较，差异有统计学意义（P<0.01）；对RA FLS作用72小时后，HL131012、HL131074、HL131078的IC50（μmol/L）值分别为3.58±0.484，9.74±1.677，5.44±0.785，与阳性药物IC50（μmol/L）（13.56±1.471）比较，差异有统计学意义（P<0.01）。综合以上数据得出，在对RAFLS分别作用24h、48h、72h时，小分子化合物HL131078和阳性药物对其增殖的IC50相比较，差异都有统计学意义（P<0.01）。3. ELISA结果显示高浓度各小分子化合物组的IL-6/MMP-3含量分别与低浓度各小分子化合物组的IL-6/MMP-3含量比较，差异有统计学意义（P<0.01）；高浓度时，HL131012，HL131078组的IL-6（pg.ml-1）和MMP-3（ng.ml-1）含量分别为（13.68±0.91，0.268±0.02），（17.69±0.42，0.313±0.014），与阳性药物组IL-6和MMP-3的含量（19.93±0.97，0.329±0.011）比较，差异有统计学意义（P<0.01）。结论小分子Syk抑制化合物HL131078能够抑制TNF-α诱导的类风湿关节炎成纤维滑膜细胞增殖。小分子化合物HL131012，HL131078能够显著抑制TNF-α诱导的类风湿关节炎成纤维滑膜细胞分泌IL-6和MMP-3。小分子化合物HL131078具有较好的抗RA的生物学活性，可以作为本课题进一步研究对象，并有可能为今后开发治疗RA的新型药物提供参考价值。