藏药喜马拉雅紫茉莉的质量研究

来源 :北京中医药大学 | 被引量 : 9次 | 上传用户:naocan528
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藏医药学是我国传统医药学中重要的组成部分,使用历史悠久,理论体系完整,为藏族人民的生命健康作出了巨大贡献。藏医药的使用颇具民族特色,多采用药味较多的复方,如七十味珍珠丸等。如此大的配方组成,怎样保证每一批药材的质量,如何对其进行质量控制,是藏药开发推广所面临的关键问题。而由于藏药的现代研究时间较短,大部分药材活性物质基础并不明确,缺乏科学有效的质量控制标准。因此,对原药材的质量进行评价,制定具有藏医特色的质量标准是非常必要的。喜马拉雅紫茉莉为紫茉莉科植物喜马拉雅紫茉莉Mirabilis himalaica (Edgew.) Heim的干燥根。藏医学认为,喜马拉雅紫茉莉具有引黄水、益肾滋补、利尿排石等多种功能,在藏医药名著《四部医典》和《晶珠本草》中均有记载。该药使用历史悠久,用量较大,但由于地域及历史的原因,其现代研究还较少,对其化学成分及药理活性的研究处于初步阶段,该药的质量评价标准也不完善,缺乏栽培品与野生品的对比研究。另外,由于性状相似,其与同科植物紫茉莉易混淆,这些阻碍了其应用与推广,对其进行相关研究具有迫切性。本研究以喜马拉雅紫茉莉为研究对象,从化学成分及药理活性、质量评价标准、分子鉴定及气味物质评价等四个方面开展了研究,对该药材的化学成分进行了初步分离,测定了粗提部位的药效活性,建立了该药材的薄层色谱方法,建立了该药材有效物质HPLC含量测定的方法,测定了该药材的DNA分子序列,建立了该药材气味物质测定的方法,并对收集的样品进行了相关实验。具体实验结果如下:1化学成分的初步分离及粗提部位的药效实验取喜马拉雅紫茉莉干燥根,粉碎后以浓度70%乙醇于70℃提取3次,得2kg浸膏。将浸膏悬浮于温热蒸馏水中,分别以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得5部分萃取物。取二氯甲烷部位以不同极性流动相进行分离、纯化、结晶,得到3个单体化合物,鉴定为小檗碱、胡萝卜苷、β-谷甾醇。小檗碱为首次从该药材中分离得到。通过细胞试验测定了粗提物对大鼠VSMC和H9c2细胞的影响。利用MTT比色法进行细胞活力检测,利用测得的吸光度值进行数据分析。结果,二氯甲烷部位及水提部位对VSMC细胞损伤具有保护作用,二氯甲烷部位对H9c2细胞损伤具有较好的疗效,水提部位无类似功能。2喜马拉雅紫茉莉的薄层鉴别方法学研究以喜马拉雅紫茉莉对照药材、β-谷甾醇及胡萝卜苷为对照品,采用单因素试验法,对影响薄层色谱的各种因素进行系统考察,筛选出最佳的薄层色谱条件,并对不同批次的药材进行鉴别。筛选得到的薄层色谱条件为:硅胶G薄层板、提取溶剂(甲醇)、提取方式(超声提取)、提取时间(30mmin)、展开剂(石油醚-乙酸乙酯-丙酮(5:2:1))、点样量(6μL)及显色剂(5%硫酸乙醇溶液)。结果,喜马拉雅紫茉莉药材显现出6个清晰的斑点,可以作为特征斑点。3喜马拉雅紫茉莉药材中葫芦巴碱的含量测定采用单因素试验法,对影响含量测定的各种因素进行系统考察,包括色谱柱的类型、提取溶剂、提取时间及流动相的选择等。最终确定色谱条件为:ZORBAX XDB-CN色谱柱(4.6×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.03%冰醋酸(85:15);流速:0.8mL.min-1:检测波长:265nm,参比波长:360nnm;柱温:30℃。以峰面积(A)对对照品溶液浓度(C)进行回归计算,得回归方程A=23.409C-26.398,相关系数R=0.9998,葫芦巴碱的平均回收率为99.57%,RSD为1.11%,葫芦巴碱在2.004-200.400μg·mL-1范围内与峰面积线性关系良好。利用建立的条件对收集的样品进行含量测定,测得对照药材中葫芦巴碱的含量为0.5057mg·g-1,其他样品葫芦巴碱的含量在0.1094~0.2897mg·g-1范围之间。4喜马拉雅紫茉莉的分子鉴定研究提取喜马拉雅紫茉莉药材的DNA,以ITS序列通用引物进行PCR扩增,扩增产物经纯化后测序,利用NCBI数据库及MIEGA5.0等软件对数据进行分析,利用紫茉莉科黄细心属Boerhavia spicata.为外类群构建系统发育树。结果,各样品遗传距离数值差异较小,碱基序列变异位点也较小。从分子方面显示不同产地栽培及野生喜马拉雅紫茉莉药材的变异较小,为栽培品的使用提供依据。5喜马拉雅紫茉莉气味物质的研究采用正交实验法,对影响电子鼻实验结果的各种因素进行筛选,找到最佳的实验条件:样品量(0.6g)、孵化温度(50℃)、孵化时间(400s)及进样体积(2500μL)。利用得到的电子鼻实验条件结合多种数据处理方法(主成分分析法、判别分析法、聚类分析法及人工神经网络)对所收集的喜马拉雅紫茉莉及紫茉莉样品测试。结果,主成分分析中PC1为94.318%、PC2为5.385%;判别分析中DF1为99.3%、DF2为0.4%;聚类分析中,紫茉莉聚为一类,其他样品聚为一类;人工神经网络中训练集与测试集的平均整体相对误差都小于0.1%,训练集的分类正确率为50.8%,测试集的分类正确率为31.1%,保持集的分类正确率为40.0%。显示不同产地、栽培及野生喜马拉雅紫茉莉样品在气味物质方面没有显著性差异,而紫茉莉与喜马拉雅紫茉莉的区别明显,说明紫茉莉与喜马拉雅紫茉莉挥发性成分差异较大。
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