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目的：肺癌是当前发病率和致死率最高的恶性肿瘤。而肺癌细胞发生多药耐药（multidrug resistance，MDR）是导致肺癌化疗失败、预后不佳的最主要原因。研究发现Bcl-2和ABCC4蛋白在多种恶性肿瘤细胞中呈高表达，并可能介导了肿瘤MDR的发生。本课题旨在观察miR-125b在A549及其耐药细胞株A549/DDP中的表达差异，探讨miR-125b对Bcl-2和ABCC4的mRNA及蛋白表达的调控及其意义。方法：1.通过miRNA芯片检测肺腺癌细胞株A549及其多药耐药细胞株A549/DDP的miRNA表达谱，找出差异表达的miRNA。2.通过qRT-PCR对芯片结果进行验证。3.通过生物信息学软件对miR-125b的靶基因进行预测。4.通过荧光素酶报告基因实验验证靶基因。5.将miR-125b的模拟物转染至A549/DDP细胞株中，检测其靶基因蛋白的表达。6.通过MTT实验检测miR-125b对肺癌耐药细胞株A549/DDP药物敏感性的影响。7.通过流式细胞术分析miR-125b对肺癌多药耐药细胞细胞株A549/DDP的凋亡敏感性的影响。结果：1.通过对A549和A549/DDP中miRNAs表达谱数据进行分析，以A549细胞株为对照组，差异值≥1.19（P<0.05）为筛选标准，得22条有差异表达的miRNA，其中耐药株A549/DDP中上调的miRNA有14条，下调的miRNA有8条。2.将表达差异显著的两种miRNA进行实时定量PCR检测，结果显示：miR-125b的表达在A549/DDP细胞中较A549细胞中显著降低，而mir-24的表达显著升高，这一结果与miRNA芯片结果一致，提示miRNA芯片结果能正确反映A549和A549/DDP细胞株中miRNA的表达差异。3.通过查阅相关文献并利用生物信息学软件，发现在miR-125b预测的靶基因中包括Bcl-2及ABCC4，且两种基因已被证实在多种恶性肿瘤中发挥作用。4. miR-125b通过结合克隆于荧光素酶基因编码区下游的Bcl-23’UTR及ABCC4-23’UTR的靶位点，抑制荧光素酶表达，破坏该靶位点可以解除miR-125b对荧光素酶表达的抑制效应。5.与对照细胞相比，转染miR-125b模拟物的A549/DDP细胞的Bcl-2和ABCC4蛋白水平明显降低。6.体外药物敏感性实验表明，相对于对照组，转染miR-125b模拟物的A549/DDP细胞对不同化疗药物的敏感性显著增加。7.流式细胞术分析结果表明，与对照细胞相比，转染miR-125b模拟物的A549/DDP细胞对化疗药物诱导的凋亡的敏感性显著增加。结论：1.miRNA在肺腺癌细胞株A549和多药耐药细胞株A549/DDP中的表达存在差异，这些差异表达的miRNA可能参与肺癌多药耐药的产生。2.miR-125b可能是通过抑制其靶基因Bcl-2和ABCC4的表达，从而调节肺癌细胞对于化疗药物诱导的凋亡的敏感性。