【摘 要】
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纳米金(Gold nanoparticles,AuNP)是一种直径在1~100nm的金颗粒,在分子生物学领域得到广泛应用,显示了其作为新兴材料的优越性。本研究为了探讨纳米金技术用于小反刍兽疫病毒(Peste des petities rumiants virus,PPRV)核酸检测的可行性,进行了两种实验方法,并讨论了各自的优越性。1、纳米金溶液的制备及表征为了获得颗粒大小均匀、单分散性强、性质稳
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纳米金(Gold nanoparticles,AuNP)是一种直径在1~100nm的金颗粒,在分子生物学领域得到广泛应用,显示了其作为新兴材料的优越性。本研究为了探讨纳米金技术用于小反刍兽疫病毒(Peste des petities rumiants virus,PPRV)核酸检测的可行性,进行了两种实验方法,并讨论了各自的优越性。1、纳米金溶液的制备及表征为了获得颗粒大小均匀、单分散性强、性质稳定的纳米金以供后续实验之用,采用柠檬酸钠还原法制备纳米金溶液,并用全波长扫描法、透射电子显微镜观察法对所制备的纳米金颗粒进行表征。结果表明,所制备的纳米金直径约为13nm,符合标记核酸探针进行检测的要求。2、基于纳米金和磁珠的核酸探针检测PPRV的研究使用纳米金、磁珠及辣根过氧化物酶三种主要材料,建立了一种快速检测PPRV核酸的方法。优化反应物的最佳工作浓度,并分析方法的特异性和灵敏性。将该方法用于检测PPRVN基因ssDNA,检测信号在1μM至10fM之间具有良好的线性关系。在PPRVRNA检测中,OD450nm与RNA浓度在100ng/μl至20ng/μl之间呈良好的线性关系。本实验整个实验过程所需时间约为45min。以上结果表明,该方法灵敏度高,快捷方便,是纳米金检测核酸研究的新方法,具有一定研究价值及应用价值。3、纳米金标记核酸探针检测小反刍兽疫病毒核酸的研究采用纳米金、生物素-亲和素系统及硝酸银信号放大检测核酸。优化了反应温度、时间,银染液的组分及银染时间,初步检测PPRVN基因ssDNA最低浓度达10fM,所需时间约为1.5h。该方法灵敏度高,操作简单,为核酸检测研究及临床检测PPRV核酸提供实验数据和技术支持。本研究建立和分析了纳米金-磁珠HRP信号放大法和纳米金-银染信号放大法检测PPRVN基因核酸检测,实现纳米金技术在PPRV的使用,丰富了纳米金技术在生物分子检测的运用的内容,有望为纳米金技术在方法学研究提供思路。
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