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目的:观察西格列汀对高糖环境下肾小管上皮细胞的保护作用及对ERK1/2通路的影响。方法:将大鼠的近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)复苏后放在含10%胎牛血清(Fatal Bovine Serun,FBS)的低糖DMEM中培养,等细胞生长到大概70%-80%融合的时候,换成不含FBS的DMEM培养基继续培养24小时,待细胞生长同步化后进行分组。将NRK-52E细胞分成正常糖组、高渗透压对照组、高糖组、西格列汀干预组、PD98059(ERK1/2通路抑制剂)组,高糖组又按照不同的诱导时间分成30min、1小时、6小时、12小时、24小时五个组;Western Blot法测各组细胞总的ERK1/2蛋白和磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)蛋白的表达;用流式细胞法测同一时刻不同组的细胞凋亡相应蛋白bax与bcl-2的比值和各细胞组的凋亡率,RT-PCR法测各组细胞bax m RNA以及bcl-2 m RNA的水平。结果:1.肾小管上皮细胞受到高糖刺激后,其内的ERK1/2通路在30min时开始活化,12小时时达高峰,一直活化到24小时时恢复到基础水平,各组细胞总的ERK1/2蛋白水平没有显著的差别。正常组和高渗组中没有测到P-ERK1/2蛋白;PD98059干预后可显著的降低高糖而导致的P-ERK1/2蛋白水平,DPP-IV抑制剂西格列汀也可以降低同一时刻高糖作用而引起的P-ERK1/2表达水平。2.流式细胞法检测结果:(1)各细胞组的凋亡蛋白bax与bcl-2比值检测的结果:正常组与高渗组bax/bcl-2无明显差别;和正常组相比,高糖组bax/bcl-2比值明显上升(P<0.05);和高糖组比较,bax比bcl-2在PD98059组和西格列汀干预组都明显的下降(P<0.05),且在PD98059组下降的更加明显。(2)不同细胞分组的凋亡率检查结果:正常糖组细胞的凋亡率为(4.45±0.28)%;高渗组中的凋亡率为(4.63±0.58)%,与正常组相比,差别在统计学上没有意义;高糖组细胞的凋亡明显增加,为(16.28±1.07)%,与正常糖组相比,差别在统计学上有意义(P<0.05);PD98059处理后的细胞组中的凋亡率为(9.65±0.69)%,较高糖组呈现明显下降,差异在统计学上有意义(P<0.05);西格列汀干预组中细胞的凋亡率为(11.67±1.13)%,较高糖组下降28%,差异在统计学上有意义(P<0.05)。3.荧光定量PCR结果示:(1)和正常组相比较而言高糖组中的bax m RNA扩增水平显著的升高(P<0.05);与高糖组相比较,PD98059组中及西格列汀干预组中bax m RNA的水平都显著的降低(P<0.05),且在PD98059组降低的更明显;高渗对照组bax m RNA水平和正常组相比较没有统计学上的区别。(2)与正常组相比较时,高渗组中bcl-2 m RNA扩增水平没有显著的变化,高糖组bcl-2 m RNA水平呈现显著的下降;与高糖组相比时,PD98059组中及西格列汀干预组中bcl-2 m RNA的水平均明显上升(P<0.05),且在PD98059组上升更明显。结论:1.本实验证再次实了高糖可刺激肾小管上皮细胞ERK1/2信号通路的活化;2.西格列汀可能部分通过抑制ERK1/2通路的活化,使得bax/bcl-2明显降低,减少了高糖状况下的NRK-52E细胞的凋亡。