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目的：恶性肿瘤严重威胁人类健康，而淋巴道转移是上皮来源恶性肿瘤细胞的早期主要转移方式，并直接导致了肿瘤患者的死亡率高、预后差，但是恶性肿瘤的淋巴道转移发生机制至今仍不清。目前肿瘤转移的细胞模型被视为研究肿瘤转移分子机制的可靠途径。Anxa3（膜联蛋白A3, Annexin A3）是我们前期采用定量蛋白质组学及生物信息学方法，筛选出的一个可能促进肝癌淋巴道转移关键性因子。但目前Anxa3与肿瘤淋巴道转移明确关系研究鲜有报道。本论文以Anxa3为研究对象，试图构建pEGFP-N1-Anxa3表达载体稳定转染Hca-P细胞获得Anxa3表达水平上调的Hca-p细胞株，探究Anxa3表达水平上调对小鼠肝癌低淋巴道转移力细胞株Hca-P增殖、侵袭、迁移和淋巴道转移能力的影响,以此对肿瘤淋巴道转移机制研究提供一定实验基础数据。方法：1.采用RT-PCR方法获得Anxa3CDS，将纯化后的PCR产物加A尾，与PMD18-T进行T-A克隆，得到T-Anxa3克隆质粒，进行PCR、单双酶切及测序鉴定。将T-Anxa3和pEGFP-N1空质粒分别进行SalⅠ和BamHⅠ双酶切，纯化并连接，获得pEGFP-N1-Anxa3表达质粒，并进行PCR鉴定及单双酶切鉴定。在确定pEGFP-N1-Anxa3载体构建成功后，行测序鉴定。2.采用Sofast转染试剂分别将pEGFP-N1-Anxa3环状质粒及线性化质粒转染Hca-P细胞，转染24h后用含400μg/ml G418的15%胎牛血清的RPMI-1640培养基进行筛选。3.转染后用有限稀释法筛选单克隆细胞，观察其形态变化，采用Real-time PCR和Western blot分别检测Anxa3在mRNA和蛋白水平的表达水平。以三组细胞（Hca-P细胞，转染pEGFP-N1空质粒的阴性对照，单克隆细胞Hca-Pneo）为实验对象，1）采用CCK-8法检测Anxa3表达上调对Hca-P细胞增殖能力的影响；2） Transwell小室法分析Anxa3表达上调对Hca-P细胞侵袭和迁移能力的影响；3）采用小鼠足垫种植方法分析Anxa3表达上调对Hca-P细胞株体内成瘤及淋巴结转移潜能的影响。结果：1.成功构建T-Anxa3克隆载体和pEGFP-N1-Anxa3真核表达载体，经测序鉴定，所得到载体中Anxa3的CDS序列无误。2.获得单克隆细胞株Hca-Pneo，1）Real-Time PCR结果显示:与Hca-P细胞相比，单克隆细胞株Hca-Pneo中Anxa3在mRNA水平表达上调1.7倍；2） Western blot结果显示单克隆细胞株Hca-Pneo中Anxa3在蛋白水平上表达上调1.6倍；3）CCK-8检测结果显示Anxa3表达上调对Hca-P细胞增殖能力无明显影响；4）Anxa3表达上调促进Hca-P细胞侵袭和迁移能力；5）体内淋巴结转移实验显示，Anxa3表达上调组小鼠足垫接种后原发部位肿瘤溃烂明显，淋巴结转移率高于对照组。结论：1. T-Anxa3克隆质粒构建成功；pEGFP-N1-Anxa3表达质粒构建成功。2.获得单克隆细胞株Hca-Pneo并且证实Anxa3在mRNA和蛋白水平表达上调。Anxa3表达上调能够促进Hca-P细胞侵袭、迁移和体内淋巴结转移，但不明显影响其增殖。