研究背景:理中丸、小建中汤和吴茱萸汤是《伤寒论》中的经典名方,具有温中散寒止痛的功效,在中医《方剂学》教材中归属于温里剂,主治中焦寒证。脘腹疼痛是中焦虚寒证的主要表现之一,通过温中散寒的治疗方法可以有效减缓疼痛。胰腺位处中焦,受到炎症影响,可出现疼痛。吴茱萸汤、小建中汤、理中丸(温中三方)均对中焦寒痛疗效显著,现代研究证明它们均可用于治疗慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)。热敏通道瞬时感受器电位锚蛋白亚型1(Transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1)在慢性胰腺炎发病中发挥重要作用,TRPA1介导胰腺的神经元性炎症和痛觉过敏,阻断该通路能显著缓解疼痛,减轻炎症。已报道温中三方中包含的干姜、生姜、肉桂、吴茱萸中所含有的有效成分姜酚、肉桂醛和吴茱萸碱等具有调节TRPA1的作用。温中三方治疗胰腺炎症及疼痛可能是通过活化、脱敏或抑制TRPA1而实现。本研究通过长时间反复多次注射雨蛙素的实验手段诱导产生小鼠慢性胰腺炎模型,采用温中三方进行干预,通过小鼠疼痛行为学测定、髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)和血清淀粉酶(Amylase,AMY)测定、胰腺组织病理学分级以及免疫组织化学、免疫蛋白印迹(Western Blot)等实验方式,从热敏通道TRPA1的角度揭示理中丸、小建中汤、吴茱萸汤治疗CP的炎症和疼痛的分子生物学机制。研究目的:探讨热敏通道TRPA1在理中丸、小建中汤和吴茱萸汤治疗慢性胰腺炎中发挥缓解疼痛和减轻炎症的作用机制,为阐明方剂药效科学内涵提供实验依据,对中医临床作出指导。研究方法:1.通过长期反复多次腹腔注射雨蛙素的实验手段诱导产生小鼠慢性胰腺炎模型,采用理中丸、小建中汤和吴茱萸汤进行干预,观察温中三方对小鼠疼痛行为的影响。2.复制CP小鼠模型,取小鼠血液用于血清淀粉酶的检测,取小鼠胰腺组织以ELISA法检测髓过氧化物酶活性、HE染色法用于胰腺组织病理分级,观察组织病理学变化。3.在小鼠CP模型上,应用免疫组化和免疫蛋白印迹法(Western Blot)检测TRPA1、PAR2、cPLA2和EP4受体在小鼠胰腺组织的定位和表达。研究结果:1.小鼠慢性胰腺炎行为学实验雨蛙素腹腔注射造模后,在机械痛实验中,模型组对纤维丝敏感性增强,差异具有统计学意义(P<0.01),在给药治疗后,理中丸组、小建中汤组和吴茱萸汤组与模型组比较,敏感性下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。2.小鼠CP生理、病理实验模型组小鼠胰腺损伤程度明显,与正常组比较,病理评分高,两者之间存在统计学意义(P<0.01),理中丸、小建中汤、吴茱萸汤与模型组进行比较,三方治疗后,三组病理损伤程度改善,评分低于模型组,两者之间存在统计学意义(P<0.01)。雨蛙素造模后,与正常组进行比较,小鼠MPO明显增高,两组之间进行比较差异具有统计学意义(P<0.01),给药治疗后,阳性对照组、中药治疗组小鼠MPO值较模型组降低,各组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。模型组小鼠血AMY值较正常组升高,差异具有统计学意义(P<0.01),理中丸组、小建中汤组和吴茱萸汤组与模型组比较,AMY值显著下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。3.CP小鼠胰腺免疫组化及免疫蛋白印迹实验三方对小鼠胰腺组织TRPA1的表达影响。胰腺组织中的TRPA1表达在造模后与正常组比较显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),经中药给药后,TRPA1表达与模型组比较表达量下降,差异有统计学意义(P<0.01)。三方对小鼠胰腺组织PAR2的表达影响。雨蛙素造模后,PAR2在小鼠胰腺组织中表达高于正常组,差异有统计学意义(P<0.01),给理中丸、小建中汤和吴茱萸汤后,组织中的PAR2表达量显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。三方对小鼠胰腺组织cPLA2的表达影响。造模后,与正常组比较cPLA2表达增加,差异有统计学意义(P<0.01),三方给药后,胰腺组织中cPLA2表达较模型组下降,差异有统计学意义(P<0.01)。三方对小鼠胰腺组织EP4的表达影响。小鼠胰腺组织中EP4含量在雨蛙素造模后显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),经给药治疗后,治疗组EP4含量显著下调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:理中丸、小建中汤和吴茱萸汤三方均能降低胰腺组织中PAR2、cPLA2、EP4和TRPA1受体的表达量,抑制TRPA1通道的活性,减少其下游炎症物质释放,从而改善了胰腺炎症,缓解了腹部疼痛。