多杀菌素因其具有对靶标害虫的高效性和环境友好性特征而被广泛用于农作物害虫以及动物寄生虫的防治。野生型刺糖多孢菌多杀菌素的生物合成能力很低,因此利用基因工程改造刺糖多孢菌成为一种广泛应用的方法。本研究尝试通过增加多杀菌素合成基因簇内基因的拷贝数的方法,增加刺糖多孢菌多杀菌素的生物合成。本论文利用PCR技术分别从刺糖多孢菌SP06081中扩增了1206 bp的spnG基因和1249bp的spnK基因,TA克隆至pMD18-T载体并测序,然后分别将spnG基因和spnK基因克隆至表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达了43 kDa和45 kDa的重组蛋白SpnG和SpnK。质谱鉴定表明,该重组蛋白SpnG和SpnK得到了很好的鉴定。为进一步纯化这两个酶并研究其酶促反应动力学特性提供了物质保障。本研究利用本研究室构建的大肠杆菌-链霉菌穿梭表达载体pMF,将spnG基因和spnK基因分别克隆至pMF载体,得到了重组质粒pMF-spnG和pMF-spnK。通过接合转移将pMF-spnG载体转入天蓝色链霉菌M145和变铅青链霉菌TK24中。转化子和对照菌株菌体全蛋白的SDS-PAGE分析,结果转化子均检测到了的43 kDa SpnG蛋白,质谱结果也表明该蛋白确实为SpnG蛋白。转化子和对照菌株的平板培养观察和摇瓶发酵产量测定结果表明,平板中转化子均比对照菌株的十一烷基灵菌素的颜色更深,转化子M145/pMF-spnG形成孢子时间比对照菌株更早,发酵液中转化子M145/pMF-spnG的放线紫红素产量分别比对照M145和M145/pMF菌株提高了210%和190%,转化子TK24/pMF-spnG的放线紫红素产量分别比对照TK24和TK24/pMF菌株提高了2200%和1800%。说明spnG基因在两个链霉菌中的表达促进了次级代谢物的产生。本研究首次从刺糖多孢菌SP06081中克隆了spnG基因和spnK基因,分别亚克隆至pMF载体上,并且在链霉菌中进行了初步的功能研究,为将这两个基因在刺糖多孢菌中多拷贝的研究奠定了基础。