长春西汀对脑缺血再灌注MMP-9表达及BBB通透性的影响

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目的观察长春西汀对大鼠局灶性脑缺血再灌注后MMP-9表达及BBB通透性的影响,进一步探讨长春西汀对脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法选取健康雄性Wistar大鼠,体重220-240g,随机分为3组:假手术组、模型对照组和长春西汀组。按脑缺血再灌注后6h、12h、24h、72h分为4个时间点。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞2h后再灌注模型。长春西汀组于缺血再灌注1h后腹腔注射长春西汀药物,模型对照组给予相应体积生理盐水,假手术组不给药。分别于各时间点进行神经功能评分;采用TTC染色法检测脑梗死体积;采用干、湿重法检测脑组织含水量;采用HE染色观察神经元变性坏死;采用免疫组织化学方法检测MMP-9表达;通过EB渗出量观察BBB通透性;采用SPSS17.0统计软件分析数据,以均数±标准差(X±S)表示,多组数据比较采用单因素方差分析,任意两组数据比较采用q检验,结果P<0.05有统计学差异。结果神经功能评分:假手术组无神经功能缺损,评分均满分;与假手术组比较,模型对照组和长春西汀组神经功能评分明显降低;与模型对照组比较,长春西汀组在12h、24h、72h时间点神经功能评分显著增高(P<0.05)。脑梗死体积测定:假手术组经TTC染色无脑梗死出现;模型对照组颞叶皮质可见明显的白色梗死灶;与模型对照组比较,长春西汀组在12h、24h、72h时间点脑梗死体积显著降低(P<0.05)。脑组织含水量测定:模型对照组缺血再灌注6h就出现脑含水量增加,至24h持续增加,72h达高峰;与模型对照组比较,长春西汀组在12h、24h、72h时间点脑含水量显著降低(P<0.05)。HE染色:假手术组神经元结构完整,细胞排列整齐;模型对照组缺血再灌注后6h即能观察到神经元形态变形,呈杆状、梭状、或三角形,至再灌注24h-72h时损害效应明显,胞核深染、固缩,部分细胞正常结构消失,水肿明显。MMP-9的免疫组化测定:假手术组各时间点MMP-9均有少量表达;与假手术组比较,模型对照组6h可见MMP-9表达增高,12h持续增加,24h更为显著,各时点表达均高于假手术组(P<0.05);与模型对照组比较,长春西汀组在各时间点MMP-9表达显著降低(P<0.05)。EB含量测定:假手术组EB含量较低且无明显动态变化;与假手术组比较,模型对照组EB含量在6h开始升高,24h达到高峰,各时点均显著增高(P<0.05);与模型对照组比较,长春西汀组在12h、24h、72h时间点EB含量显著降低(P<0.05)。结论1、脑缺血再灌注后脑组织MMP-9表达增高,EB渗出量增加,且呈动态变化,表明MMP-9表达、BBB通透性的改变参与了脑缺血再灌注损伤过程。2、应用长春西汀后,MMP-9表达降低、EB渗出量降低,与之相应的神经功能评分、脑梗死体积、脑水肿程度均得到改善,表明降低MMP-9表达、降低BBB通透性可能是长春西汀对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制之一。
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