miR-326靶向调节PAX8抑制滋养细胞增殖及侵袭相关机制的研究

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目的:探讨miR-326调节滋养细胞增殖及侵袭在子痫前期发病过程中的作用,为子痫前期的诊疗提供新的理论基础。方法:1.标本:(1)收集正常妊娠妇女(n=6)胎盘组织及子痫前期孕妇(n=6)胎盘组织。(2)滋养细胞HTR-8/SVneo和JEG-3。2.实验方法:(1)应用q RT-PCR技术检测胎盘组织中miR-326的表达水平。(2)应用Transwell、CCK-8与克隆形成实验检测被转染滋养细胞的侵袭和增殖能力变化情况。(3)在线数据库Target Scan预测miR-326可能的靶基因。(4)应用q RT-PCR技术和Western blot检测相关分子的miRNA及蛋白的表达水平。(5)建立靶蛋白的过表达和敲减细胞株。(6)应用miR-326类似物和PAX8过表达慢病毒同时处理并转染滋养细胞,检测滋养细胞的侵袭及增殖能力的变化。结果:1.子痫前期患者胎盘组织中miR-326表达水平显著高于正常妊娠妇女胎盘组织。2.MiR-326类似物能使滋养细胞HTR-8/SVneo中miR-326过表达,并能显著抑制滋养细胞的增殖能力和侵袭能力。MiR-326抑制剂抑制滋养细胞miR-326的表达,并能显著增强滋养细胞JEG-3的增殖能力与侵袭能力。3.线上数据库(Target Scan、miRDB和micro RNA.org)预测miR-326的下游靶基因为PAX8。4.PAX8的过表达慢病毒与敲减载体转染效率较高。5.过表达PAX8滋养细胞JEG-3的增殖能力与侵袭能力显著提高,敲减PAX8的滋养细胞HTR-8/SVneo的增殖能力和侵袭能力显著下降。6.将miR-326类似物处理的滋养细胞HTR-8/SVneo再转染PAX8过表达慢病毒,结果发现升高miR-326的表达,其对滋养细胞增殖、侵袭的抑制作用可以被PAX8的过表达逆转。结论:1.MiR-326能显著抑制滋养细胞的增殖及侵袭能力。2.MiR-326通过靶向调节滋养细胞内PAX8抑制滋养细胞的增殖及侵袭能力。
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