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本文旨在对奶牛用酶筛选的关键因素进行探讨,初步建立筛选方法,并通过体内外相结合的试验技术对初选酶制剂效果进行验证。试验一,选择5种纤维素酶产品(C1、C2、C3、C4、C5)和5种木聚糖酶产品(X1、X2、X3、X4、X5)分别在不同pH(4.0、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0)、不同温度(37℃、39℃和50℃)、不同底物和瘤胃离子强度条件下测定纤维素酶和木聚糖酶活性表现;试验二,在瘤胃条件(39℃、pH6.0和瘤胃离子强度)下,测定10种酶对苜蓿、羊草、玉米秸秆和玉米青贮4种粗饲料为底物还原糖的产生量,根据酶在最适条件和瘤胃条件酶活性损失情况和分解底物产生还原糖的量的多少初步筛选出适合奶牛日粮应用酶产品,并探讨酶活性种类(纤维素酶与木聚糖酶)与还原糖产生量的相关性;试验三,采用正交试验设计对初选的几种酶制剂进行配伍,筛选出针对不同粗饲料最适酶制剂组合并研究酶添加水平对底物DM降解率的影响;试验四,应用人工瘤胃产气法研究所筛选的酶制剂组合对4种粗饲料体外产气量、DM和NDF降解率的影响;试验五,通过饲养试验研究酶制剂组合对奶牛产奶量、乳成分的影响,对酶制剂效果进行验证。结果表明:1.温度、pH、测定底物和离子强度对纤维素酶和木聚糖酶活性均有不同程度的影响,其中温度和pH是影响纤维素酶和木聚糖酶活性的关键因素,瘤胃离子强度对多数纤维素酶和木聚糖酶有抑制作用但是影响较小,筛选纤维素酶和木聚糖酶与测定底物的选择无关。2.酶分解苜蓿、玉米秸秆和玉米青贮产生还原糖的量与纤维素酶活性成正相关(R2为0.8848、0.9135和0.7343,P < 0.01),分解羊草产生还原糖的量与木聚糖酶活性成正相关(R2 = 0.6408,P < 0.01),选择C1、C3、X1和X4为初步筛选的酶制剂产品。3.在本试验条件下,苜蓿、玉米秸秆和羊草最适的酶制剂组合和比例是C1:C3:X1:X4 = 1:3:3:3,对玉米青贮最适的酶制剂组合和比例是C1:C3:X1:X4 = 3:3:2:1。4.发酵后4h到试验结束,试验组在各时间点的产气量均高于对照组但差异不显著(P > 0.05),在产气初期加酶效果不明显。发酵后6h 4种粗饲料DM和NDF降解率差异不显著(P < 0.05),在12h和24h加酶显著的提高羊草DM降解率(P < 0.05),对其他3种粗饲料DM降解率影响较小但试验组在数值上略高于对照组;发酵后12h加酶显著提高苜蓿、羊草、玉米青贮NDF降解率(P < 0.05),但对玉米秸秆NDF降解率影响不显著只是数值上试验组高于对照组;在发酵后24h加酶显著的提高玉米青贮NDF降解率(P < 0.05),对苜蓿、玉米秸杆和羊草NDF降解率影响差异不显著(P > 0.05)。5.以玉米青贮为主要粗饲料的奶牛日粮中添加酶制剂(纤维素酶和木聚糖酶)有增加产奶量的趋势;能提高乳中乳糖、非脂固形物和乳总固形物的含量(P < 0.05),对乳脂肪和乳蛋白的含量影响较小(P > 0.05)。