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背景:子宫内膜癌是最常见的妇科肿瘤之一。近年来,子宫内膜癌的发病率逐渐上升。据报道,每年有319500个新发病例,以及超过76000的死亡病例。在发达国家,因子宫内膜癌死亡的病例占全部癌症死亡病例的2%。2020年中国子宫内膜癌新发病例81964例,死亡病例16607例。子宫内膜癌患者的预后一般较好,五年生存率大于80%。但是对于发生远处转移和复发的患者,其预后常常不佳。近年来,子宫内膜癌的分子分型受到重视,不同分子分型的患者,预后可能相差很大。进一步探索子宫内膜癌的发生发展的分子机制有助于加深对子宫内膜癌的了解,为子宫内膜癌的诊治提供资料。目的:子宫内膜癌常存在着多种基因的失调。ELF3是ETS转录因子家族中的一员,在多种肿瘤的发生,发展,侵袭,转移中有重要作用。TCGA数据库显示,ELF3在子宫内膜癌组织中表达上调。Lnc RNA在肿瘤的发生中发挥重要作用。长基因间非编码RNA00511（linc00511）,是一种新的致癌的lnc RNA,可通过调节细胞增殖,凋亡,侵袭和转移来驱动非小细胞肺癌中的肿瘤发生。TCGA数据库提示,linc00511在子宫内膜癌组织中表达上调。JASPAR数据库显示,ELF3与linc00511的启动子区存在理论结合位点。目前,ELF3和linc00511在子宫内膜癌中的作用及机制尚未见报道。课题组之前的研究显示,UPF1在子宫内膜癌组织中高表达,促进子宫内膜癌细胞的恶性生物学行为。在本研究中,我们旨在探索ELF3/linc00511/UPF1轴对子宫内膜癌细胞的作用及其作用机制。研究方法:1、检测ELF3和linc00511在子宫内膜组织及子宫内膜癌组织中的表达水平:收集108例组织标本,其中23例子宫内膜组织标本来自于因子宫肌瘤,子宫腺肌症等良性子宫疾病行子宫切除术的患者。另外85例子宫内膜癌组织标本来自于因子宫内膜癌行子宫切除术的患者。通过qRT-PCR检测ELF3和linc00511在组织中的RNA表达水平,并分析其表达水平和临床病理参数之间的关系。随后分析组织标本中ELF3和linc00511之间的表达相关性。利用GEPIA2分析TCGA数据库中子宫内膜组织和子宫内膜癌组织中ELF3和linc00511之间的表达相关性。Western Blot检测ELF3在组织标本中的蛋白表达水平。2、ELF3和linc00511对子宫内膜癌细胞恶性生物学行为的影响:分别构建ELF3过表达和敲减的子宫内膜癌细胞系,linc00511过表达及敲减的子宫内膜癌细胞系。通过CCK-8实验检测ELF3和linc00511对Ishikawa细胞和HEC-1A细胞增殖的影响。通过划痕实验检测ELF3和linc00511对Ishikawa细胞和HEC-1A细胞迁移能力的影响。通过transwell实验检测ELF3和linc00511对Ishikawa细胞和HEC-1A细胞侵袭能力的影响。以及通过流式细胞术检测ELF3和linc00511对Ishikawa细胞和HEC-1A细胞周期的影响。通过Western Blot检测linc00511对TGF-β/smad通路关键分子以及EMT相关蛋白的影响。3、ELF3通过调节linc00511影响子宫内膜癌细胞恶性生物学行为:通过JASPAR数据库预测ELF3与linc00511启动子区的结合位点,通过Ch IP实验验证ELF3和linc00511的结合。用qRT-PCR检测ELF3对linc00511表达的调节作用。构建ELF3敲减+linc00511过表达的子宫内膜癌细胞系,再通过CCK-8实验检测ELF3敲减和linc00511过表达共同作用对Ishikawa细胞和HEC-1A细胞增殖的影响。划痕实验检测ELF3敲减和linc00511过表达共同作用对Ishikawa细胞和HEC-1A细胞迁移的影响。Transwell实验检测ELF3敲减和linc00511过表达共同作用对Ishikawa细胞和HEC-1A细胞侵袭的影响以及流式细胞术检测ELF3敲减和linc00511过表达共同作用对Ishikawa细胞和HEC-1A细胞周期的影响。4、Linc00511通过调节UPF1影响子宫内膜癌细胞恶性生物学行为:RIPseq提示UPF1可以与linc00511结合。通过免疫荧光验证了UPF1子宫内膜癌细胞中的定位,FISH实验验证linc00511在子宫内膜癌细胞中的定位。通过RIP实验,验证linc00511与UPF1结合。通过qRT-PCR和Western Blot检测linc00511对UPF1的调节作用。构建linc00511敲减+UPF1过表达的子宫内膜癌细胞系,通过CCK-8实验检测linc00511敲减和UPF1过表达共同作用对Ishikawa细胞和HEC-1A细胞增殖的影响。划痕实验检测linc00511敲减和UPF1过表达共同作用对Ishikawa细胞和HEC-1A细胞迁移的影响,transwell实验检测linc00511敲减和UPF1过表达共同作用对Ishikawa细胞和HEC-1A细胞侵袭的影响以及流式细胞术检测linc00511敲减和UPF1过表达共同作用对Ishikawa细胞和HEC-1A细胞周期的影响。通过Western Blot检测linc00511和UPF1对TGF-β/smad通路以及EMT相关蛋白的影响。5、构建裸鼠皮下移植瘤模型,验证linc00511敲减以及linc00511敲减和UPF1过表达共同作用对移植瘤生长速度以及Ki67蛋白的影响。结果:1、子宫内膜癌组织中ELF3和linc00511的表达量均高于对照组子宫内膜组织中的表达量。ELF3和linc00511的m RNA表达水平均与肿瘤浸润深度有关。2、在Ishikawa和HEC-1A中过表达ELF3后,子宫内膜癌细胞的增殖能力,迁移能力和侵袭能力显著增强,S期的细胞比例升高。敲减ELF3可以观察到子宫内膜癌细胞的增殖能力,迁移能力和侵袭能力显著减弱,S期的细胞比例降低。3、在Ishikawa和HEC-1A中过表达linc00511后,子宫内膜癌细胞的增殖能力,迁移能力和侵袭能力显著增强,S期的细胞比例升高。敲减linc00511可以观察到子宫内膜癌细胞的增殖能力,迁移能力和侵袭能力显著减弱,S期的细胞比例降低。4、在Ishikawa和HEC-1A中过表达linc00511后,P-smad2/3与smad2/3的比值升高,smad7表达量下降,激活了TGF-β/smad通路,E-cadherin表达量下降,N-cadherin表达量上高,促进了EMT进程,沉默linc00511有相反的作用。5、JASPAR数据库显示ELF3与linc00511的启动子区存在理论结合位点,通过Ch IP实验验证了ELF3与linc00511的启动子区结合。在Ishikawa和HEC-1A中过表达或敲减ELF3后,linc00511的表达量随之升高或降低。敲减ELF3并过表达linc00511后,可以部分回复ELF3敲减对子宫内膜癌细胞增殖,迁移和侵袭的抑制作用,S期的细胞比例也有回升。ELF3转录调控linc00511的表达。6、在Ishikawa和HEC-1A中过表达linc00511后,UPF1的表达量上调,敲减linc00511则观察到相反的效果,敲减linc00511后过表达UPF1,可以部分回复linc00511敲减对子宫内膜癌细胞增殖,迁移和侵袭的抑制作用,S期的细胞比例也有回升。敲减linc00511后过表达UPF1,P-smad2/3与smad2/3比值升高,smad7表达量下降,E-cadherin表达量下降,N-cadherin表达量上高。7、RIP-seq提示linc00511与UPF1存在结合。免疫荧光结果显示,UPF1主要定位于子宫内膜癌细胞的胞质中。FISH结果显示,linc00511主要定位于子宫内膜癌细胞的胞质中。linc00511和UPF1有共同的细胞定位,存在结合的物理基础。RIP实验证明UPF1可以与linc00511结合。8、裸鼠皮下移植瘤模型也验证了敲减linc00511对肿瘤的抑制作用,过表达UPF1可以部分回复敲减linc00511对肿瘤的抑制。结论:1、首次证实了ELF3和linc00511在子宫内膜癌组织中高表达,与肿瘤浸润深度有关。2、首次发现ELF3和linc00511发挥促癌作用,促进子宫内膜癌细胞的增殖,迁移,侵袭,使S期细胞的增多。3、首次阐明ELF3转录调控linc00511,促进了linc00511的表达。Linc00511与UPF1结合,并上调UPF1蛋白的表达量,激活了TGF-β/smad通路,促进子宫内膜细胞的EMT过程。