论文部分内容阅读
目的研究自体软骨细胞(Chondrocytes)复合小肠黏膜下层(small intest inalsubmuco sa,SIS)对兔膝关节软骨缺损的修复作用。方法1.取兔膝关节表面软骨,采用单一Ⅱ型胶原酶一次消化法,消化后体外进行单层高密度培养,获得大量纯净的原代软骨细胞;2.细胞记数,台盼蓝活性检测,体外传代扩增,对其形态学进行观察,绘制生长曲线;3.行Ⅱ型胶原免疫组化和Mallory染色、甲苯胺蓝染色以鉴定软骨细胞;4.脱细胞、脱蛋白和去除浆膜层、肌层,制备脱细胞的猪小肠粘膜下层;5.将获得的软骨细胞接种于SIS上,构建细胞—载体复合物,体外培养三天后,用固定液固定后扫描电镜观察细胞和材料的复合情况;6.制作兔膝关节软骨缺损模型,分为3组,实验组植入自体软骨细胞—载体复合物,实验对照组植入单一培养基浸泡的SIS支架,空白对照组不植入任何材料,单一缺损模型。各组术后分别于第8周、第12周取材行大体观察、HE染色、Mallory染色、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色,并用Wakitani法进行组织学评分。结果1.(1)每克兔膝关节软骨完全消化后所得细胞平均为43.9×10~6个细胞,细胞存活率平均为96.4%。(2)前三代细胞生长增殖迅速,形态呈多边形,短梭形,三角形,融合时呈卵圆形。(3)聚集培养后Mallory及甲苯胺兰异染反应均为阳性,Ⅱ型胶原免疫组化阳性。2.SIS及细胞—载体复合物电镜观察可见SIS表面较整齐,呈丝网状,空隙比较均匀,具有良好的空间结构。孔隙大小为100um-300um,细胞在SIS表面及孔隙内壁均生长良好;3.第8、12周时实验组和实验对照组缺损为透明软骨样修复,空白对照组为纤维性修复。在同一时间点,实验组修复效果优于实验对照组。其中Wakitani组织学评分结果显示实验组与实验对照组有显著差异,且两组均优于空白对照组,同时各组第12周评分结果均优于第8周。结论1单纯胶原酶消化分离,体外单层聚集培养这一方法可以获取大量优良的软骨细胞。2自体软骨细胞复合SIS对关节软骨缺损有修复作用,修复效果优于支架对照组,差异有统计学意义,且两组结果均优于空白对照组。