【摘 要】
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目的：利用siRNA技术探讨HBx基因沉默对肝癌细胞HepG2.2.15迁移能力的影响。方法：1. pSIHBV/X质粒的鉴定与扩增。2. HepG2.2.15细胞的培养。3. pSIHBV/X质粒转染并检测转染效率
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目的：利用siRNA技术探讨HBx基因沉默对肝癌细胞HepG2.2.15迁移能力的影响。方法：1. pSIHBV/X质粒的鉴定与扩增。2. HepG2.2.15细胞的培养。3. pSIHBV/X质粒转染并检测转染效率。4. Transwell及划痕试验检测细胞迁移能力。5.EdU法检测细胞DNA合成情况。6.Real-time PCR法检测HBx与egf及mmp-9mRNA表达变化。7.Western blot方法检测VEGF与MMP-9蛋白表达的变化。结果：通过测序验证pSIHBV/X质粒构建正确,转染效率为38.58%；Transwell和划痕实验检测细胞迁移情况,结果显示转染72小时后,pSIHBV/X实验组迁移能力与对照组相比分别下降59.92%和38.64%,差异有统计学意义(P<0.05)；HepG2.2.15细胞转染48小时后,pSIHBV/X实验组与对照组相比DNA合成率下降9.469%(P<0.05)；Real-time PCR和Western blot检测结果表明,HepG2.2.15细胞经pSIHBV/X质粒干扰后,细胞中mmp-9、vegf、HBx的mRNA水平和MMP-9、VEGF的蛋白水平表达分别有不同程度的下调,与对照组比较差异有统计学意义(p<0.05)结论：利用HBx siRNA干扰质粒可抑制HBx基因的表达,抑制肿瘤细胞DNA合成并下调与肿瘤细胞迁移相关的mmp-9、veg基因在mRNA水平和蛋白水平的表达,降低HepG2.2.15细胞迁移的能力。
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