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目的:建立哮喘大鼠模型,观察大鼠哮喘症状、体征、气道组织病理学和支气管形态学、动物血浆和肺支气管组织中嗜酸性粒细胞(EOS)、淋巴细胞(LYM)计数、免疫球蛋白E (IgE)、细胞因子白介素4(IL-4)、干扰素Y (IFN-γ)含量、转录因子T-bet (T-box express in T cell)及GATA-3(GATA binding protein3)蛋白的表达水平,从量效、时效关系中评价天灸治疗哮喘的机理。方法:将70只SPF级SD雄性大鼠随机分为7组,分为正常组、安慰剂组、地塞米松组、大饼长程贴药组、大饼短程贴药组、小饼长程贴药组、小饼短程贴药组,每组10只。分别于实验开始第1天和第7天腹腔注射lml OVA/AL(OH)3混悬液[含10mg OVA和200mg AL(OH)3]致敏,第15天开始将大鼠放入自制雾化吸人箱内,用10mg/L OVA生理盐水溶液雾化吸入激发,连续激发2周至大鼠出现呼吸急促、哮鸣音等多种症状。除正常组以生理盐水雾化吸入以外,其余各组均以卵蛋白(OVA)致敏造模,造模成功后,将大鼠颈背去毛,对贴药组进行天灸治疗,其中大饼贴药组用1cm×1cm的药饼贴药,小饼贴药组用0.5cm×0.5cm的药饼贴药,具体穴位参照华兴邦等方法,动物饲养在气温36℃~37℃,湿度75%的类似三伏天气温的室内,将所制备药物按第1天(“上伏”)贴:定喘、肺俞、风门;第2天(“中伏”)贴:肺俞、厥阴俞、膏盲俞;第3天(“下伏”)贴:肺俞、脾俞、肾俞;第4天(“加强灸”):肺俞、脾俞、肾俞;贴药后用医用胶布固定,每次贴药5h,每天1次,4次为一疗程,然后继续常规饲养,休息3d后继续如上法治疗,依此类推,长疗程组共治疗3个疗程(12次)结束治疗,同法短程贴药组治疗1个疗程(4次)。安慰剂组以面粉调成糊状贴敷大鼠颈背,疗程同长程贴药组,地塞米松组予地塞米松0.5mg/(kg·d)进行腹腔注射,疗程同长程贴药组。所有动物都治疗完毕,末次治疗后再次用10mg/L OVA生理盐水雾化吸入激发,观察所有动物的气道症状、体征并记录之。后将大鼠麻醉,抽腹主动脉血于EP管中待用。取肺组织,其中左肺用预冷PBS清洗冻存备用,用于RNA抽提。右肺中叶用于HE染色行病理切片,光学显微镜下找到完整的细支气管横断面,采集图像,测量分析计算标准化总管壁厚度、标准化平滑肌厚度。称重右肺其余肺组织100mg置于匀浆容器中,冰浴匀浆,冻存备用。用血分析仪计数EOS、LYM,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IgE、IL-4、IFN-γ含量,采用实时荧光定量(RT-qPCR)法检测转录因子GATA-3mRNA、T-bet mRNA表达水平。结果:(1)大鼠的一般情况:正常组大鼠表现精神活泼,反应灵敏,呼吸平稳,毛色光洁,无任何一只出现呼吸急促、困难或喘鸣音。模型组大鼠在吸入OVA后不久即出现躁动不安,搔抓颜面皮毛等过敏症状,继而大鼠俯伏不动,出现呼吸急促,腹式呼吸,伴紫绀,部分大鼠可闻及响亮的呼气相喘鸣音,口鼻流出粘液。反复激发后大鼠毛色失去光泽,精神不振和反应迟钝,地塞米松组在从开始用药即出现饮水增多、迅速消瘦、黑便等表现。(2)天灸对引喘大鼠症状的影响:与正常组比较,安慰剂组引喘潜伏期明显缩短,跌倒率、打喷嚏、鼻痒抓鼻次数、点头运动的次数显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05);地塞米松组、长程贴药组与安慰剂组比较,引喘潜伏期明显延长,跌倒率、打喷嚏、鼻痒抓鼻次数、点头运动的次数明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);与短程贴药组比较,长程贴药组、地塞米松组引喘潜伏期明显延长,跌倒率、打喷嚏、鼻痒抓鼻次数、点头运动的次数明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);同疗程药饼的大小对大鼠引喘潜伏期、跌倒率、打喷嚏、鼻痒抓鼻次数、点头运动的次数无显著性差异(P>0.05);长程贴药组与地塞米松组比较,大鼠引喘潜伏期、跌倒率、打喷嚏、鼻痒抓鼻次数、点头运动的次数亦无显著性差异(P>0.05)。(3)天灸对支气管的镜下病理改变影响:安慰剂组大鼠支气管管壁厚度和平滑肌厚度明显高于正常组,差异具有统计学意义(P<0.05);长程贴药组、地塞米松组大鼠支气管管壁厚度和平滑肌厚度较短程贴药组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);长程贴药组与地塞米松组比较,大鼠支气管管壁厚度和平滑肌厚度无显著性差异(P>0.05);同疗程药饼的大小对大鼠支气管管壁厚度和平滑肌厚度的改变亦无显著性差异(P>0.05)。(4)天灸对哮喘大鼠EOS、LYM变化的影响:安慰剂组大鼠外周血及肺支气管组织中EOS、LYM较正常组明显升高,差异具有显著性(P<0.05);长程贴药组、地塞米松组与安慰剂组相比,大鼠外周血及肺支气管组织中EOS、LYM均明显降低,差异具有显著性(P<0.05);长程贴药组与地塞米松组外周血及肺支气管组织中EOS、LYM相近,无显著性差异(P>0.05);长程贴药组、地塞米松组与短程贴药组比较,大鼠外周血及肺支气管组织EOS、LYM明显降低(P<0.05);同疗程,大饼贴药组与小饼贴药组比较无明显差异(P>0.05)。(5)天灸对大鼠肺组织匀浆液中细胞因子的影响:与正常组比较,安慰剂组IFN-Y表达明显下降,IL-4、IgE表达明显增高,IFN-γ/IL-4比率明显降低,经统计均有显著差异性(P<0.05);与安慰剂组相比,长程贴药组与地塞米松组中IFN-γ的表达明显升高,IL-4、IgE的表达明显降低,IFN-γ/IL-4比率明显升高,经统计均有显著差异性(P<0.05);与短程贴药组相比,长程贴药组与地塞米松组中IFN-γ的表达明显升高,IL-4、IgE的表达明显降低,IFN-γ/IL-4比率明显升高,经统计均有显著差异性(P<0.05);长程贴药组与地塞米松组比较,对肺组织匀浆液中IFN-γ、 IL-4、IgE的改变无显著性差异(P>0.05);同疗程药饼的大小对肺组织匀浆液中IFN-γ、IL-γ, IgE的改变亦无显著性差异(P>0.05)。(6)大鼠肺组织中T-bet mRNA、GATA-3mRNA及T-bet/GATA-3mRNA比率:安慰剂中T-bet mRNA表达较正常组显著减弱,而(GATA-3mRNA表达显著增强,T-bet/GATA-3mRNA比率显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05);长程贴药组与地塞米松组中T-bet mRNA表达与短程贴药组相比则显著增强,而GATA-3mRNA表达显著减弱,T-bet/GATA-3mRNA比率亦显著上升,差异具有统计学意义(P<0.05);长程贴药组中与地塞米松组比较,T-bet mRNA、GATA-3mRNA及T-bet/GATA-3mRNA比率均无显著性差异(P>0.05);同疗程药饼的大小对大鼠T-bet mRNA、GATA-3mRNA及T-bet/GATA-3mRNA比率的改变亦无显著性差异(P>0.05)。结论:(1)天灸能够减轻哮喘气道炎症细胞浸润,改善气道粘膜上皮坏死,能降低哮喘大鼠气道总管壁、平滑肌厚度,具有改善哮喘大鼠气道炎症的作用,效果与地塞米松相当。(2)天灸能减轻大鼠哮喘症状和延长引喘潜伏期,降低跌倒率、打喷嚏、鼻痒抓鼻、点头运动的次数。随着天灸时间的推移,大鼠的气道炎症明显减轻,哮喘大鼠支气管粘膜和粘膜下EOS和LYM数量明显降低,肺支气管组织局部的炎性细胞浸润、平滑肌肥厚、水肿、管腔狭窄等病理改变明显减轻,上述提示天灸的疗程对于哮喘炎症反应的干预尤为重要,即天灸具有明显的时效性,但同疗程药饼的大小在本实验中对于大鼠哮喘症状及气道病理改变无显著意义。(3)天灸能提高哮喘大鼠肺组织低下的IFN-γ及T-bet mRNA表达水平,降低IgE、IL-4、GATA-3mRNA水平及外周血EOS数量,从而减轻支气管肺组织炎性细胞浸润,其作用机制可能与其诱导肺组织T-bet mRNA表达增多、抑制GATA-3mRNA表达,从而调节细胞因子,降低IgE、IL-4水平,升高IFN-γ,最终降低外周血EOS数量,从而减轻支气管肺组织炎性细胞浸润。