番茄抗黄化曲叶病毒基因Ty-2的精细定位及BAC文库的构建与筛选

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番茄黄化曲叶病是番茄生产中的重要病害之一。目前该病已在我国主要的番茄栽培地区大范围发生,对番茄生产带来了严重甚至是毁灭性的危害,在保护地中利用60目以上的网纱进行物理隔离,并从播种、定植至采收的全过程喷施杀虫剂可防治烟粉虱对TYLCV的传播,从而达到控制TYLCV的目的,但需要大量的投资和大量的农药,而露地番茄难以进行物理隔离,仅采用农药防治难以对TYLCV进行有效的控制。因此,抗病毒品种的选育已成为我国番茄育种最重要的育种目标之一。目前在野生资源中共发现5个抗性基因Ty-1、Ty-2、Ty-3、Ty-4和Ty-5,已通过分子标记结合田间选择培育出了一些抗病品种,主要含有Ty-1和Ty-3基因。Ty-2基因对我国的主要番茄黄化曲叶病毒小种具有抗性,因此,对Ty-2抗病基因进行精细定位并克隆,对番茄抗病毒品种的选育及其功能研究均有极其重要的意义。本研究在已有的基础上,以含有Ty-2基因材料12g-60、含有相同位置染色体片段感病的多毛番茄渐渗系LA4006及其杂交后的F2群体为主要研究材料,对Ty-2基因进行了精细定位、BAC文库构建、基因预测等研究,主要结果如下:1.利用含有Ty-2基因材料12g-60与含有相同位置染色体片段感病的多毛番茄渐渗系LA4006杂交并获得了相应的F2代群体,利用带毒的烟粉虱对该群体进行自然接种鉴定,同时利用五个分子标记对该群体的1320单株进行遗传分析,结果表明抗感比例为3:1,符合单基因遗传规律,抗病性鉴定结果与分子标记的结果一致。2.以含有Ty-2基因材料12g-60为模板构建细菌人工染色体(BAC)文库,从BAC中共筛选到4个阳性单克隆,分别为F17F24,F18E2,F118A13,F187N19。对这4个单克隆进行全长测序表明,Ty-2基因所在的多毛番茄片段与相同位置的普通番茄染色体片段存在一个倒位,因而解释了在Ty-2基因精细定位研究中出现的严重重组抑制现象。3.利用生物信息学手段对4个阳性克隆序列进行候选基因的预测,结果在目的染色体片段上存在21个的基因,分别编码2-磷酸激酶、分子伴侣、细胞色素P450、ABC转运家族G成员28等,其中Solyc11g069620.1含有NB-ARC类保守结构域,已作为Ty-2的候选基因,相应的转基因研究正在进行中。
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