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石蒜碱属石蒜科植物中的生物碱,经研究发现,石蒜碱药理作用有很多,如抗肿瘤,抗病毒等等。石蒜碱及其衍生物的开发利用可为相关疾病治愈及其医疗提供新的帮助,未来远景很好,有望成为新的研究热点。本论文采用体外试验方法系统研究石蒜碱对人胃癌SGC-7901细胞周期阻滞机制,为石蒜碱的抗肿瘤周期阻滞作用机制提供理论依据,对抗肿瘤药物治疗靶点的深入研究提供实验基础。采用MTT法检测石蒜碱对SGC-7901细胞的增殖抑制作用。MTT法结果显示作用72h后,石蒜碱的半数抑制浓度(IC50)为36.48μmol.L-1。表明石蒜碱有显著的抑制SGC-7901的作用,随给药浓度递增后,SGC-7901细胞的抑制率也逐渐增大,存在一定的线性相关性,与空白对照组比较有显著性差异。采用流式细胞术对人胃癌SGC-7901细胞进行细胞周期检测,发现石蒜碱对人胃癌SGC-7901细胞周期有阻滞作用,空白对照组,阳性药羟基喜树碱9.6μmol·L-1,三种不同浓度的石蒜碱(18.24 μmol.L-1、36.48 μmol·L-1、72.96μmol·L-1)作用人胃癌 SGC-7901 细胞 48h 后,与空白对照组比较,G1期和 S 期细胞比例减少,G2 期细胞比例分别是4.976%、49.452%、16.888%、30.244%、64.735%,并随着石蒜碱给药剂量的增加,阻滞的强度逐渐增强,呈一定剂量关系,实验结果与空白对照组比较有显著性差异。结果表明,石蒜碱可将胃癌SGC-7901细胞有效地阻滞在G2/M期,对人胃癌SGC-7901细胞有G2/M期周期阻滞作用。采用结晶紫染色法对石蒜碱作用人胃癌SGC-7901细胞后细胞核的影响研究发现,以浓度 18.24 μmol·L-1、36.48 μmol·L-1、72.96 μmol·L-1 的石蒜碱作用于人胃癌 SGC-7901 细胞 48 h 后,结果显示,空白对照组细胞无明显形态变化,细胞能继续保持正常形态且贴壁生长;给药组随着石蒜碱剂量的增加,形态发生明显改变,细胞由紧密连在一起变为间隙增大,细胞松散排列,细胞由多角型变为椭圆形,部分细胞已经开始脱壁,染色质逐渐浓缩,细胞核破碎。说明石蒜碱可使胃癌SGC-7901细胞发生染色体凝聚,细胞核破碎,给药浓度越高,凝聚现象越明显;采用蛋白免疫印迹技术Western Blot法分析,空白对照组,阳性药羟基喜树碱9.6μmol·L-1,三种不同浓度的石蒜碱(18.24 μmol·L-1、36.48 μmol·L-1、72.96 μmol·L-1)作用人胃癌SGC-7901细胞48h后,细胞周期相关蛋白CDK1/β-actin分别为0.9183,0.634,0.7881,0.7033,0.5753,结果表明随着给药剂量的增高,下调了 CDK1的表达水平,中剂量和高剂量组与空白对照组比较具有显著性差异。细胞周期相关蛋白CyclinB1/β-actin 分别为 0.9862,0.7149,0.8281,0.7848,0.7099。结果表明随着给药剂量的增高,下调了 CyclinB1的表达水平,中剂量和高剂量组与空白对照组比较具有显著性差异。细胞周期相关蛋白CDc25C/β-actin分别为0.9459,0.0978,0.5761,0.3765,0.1304。结果表明随着给药剂量的增高,下调了 CDc25C的表达水平,低剂量,中剂量和高剂量组与空白对照组比较具有显著性差异。细胞周期相关蛋白FoxM1/β-actin 分别为 0.8478,0.6449,0.8001,0.6562,0.5921。结果表明随着给药剂量的增高,下调了 FoxM1的表达水平,中剂量和高剂量组与空白对照组比较具有显著性差异。使肿瘤细胞在G2/M期起到周期阻滞作用。细胞周期相关蛋白BubR1/β-actin分别为0.3638,0.1498,0.2994,0.1728,0.1094。结果表明随着给药剂量的增高,下调了BubR1的表达水平,低剂量,中剂量和高剂量组与空白对照组比较具有显著性差异。综上所述,石蒜碱可以使人胃癌SGC-7901细胞在G2/M期发生周期阻滞,并使其DNA受损,染色体不同程度凝聚,细胞核破碎,转录因子FoxM1活性降低,FoxM1直接靶向因子Cyc1inB1表达量降低,CDK1随着给药浓度增加其表达量也降低,这一系列反应会导致CDK1/CyclinB1复合物的减少,CDc25C能够活化CDK1/CyclinB1复合物,CDc25C在胃癌SGC-7901细胞表达量降低,也会降低CDK1/CyclinB1复合物的生成,使细胞阻滞在G2/M期。另一方面当细胞阻滞在G2/M期时,细胞不会继续分裂,纺锤体以及纺锤丝会发生变化,影响相应蛋白发生变化,BubR1表达水平降低。