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灵芝作为中国传统珍贵药材,已有数千年的药用历史,具有很高的药用价值。本研究以赤芝为原料,利用水提法提取灵芝多糖,并对灵芝多糖进行分离纯化,同时研发灵芝多糖注射剂,对注射剂理化指标、致敏性反应和对小鼠抗疲劳效果及体重影响进行了初步研究,为灵芝多糖的应用提供理论依据和基础数据。主要的研究结果如下:(1)对灵芝多糖的提取工艺进行了研究,在单因素实验基础上,结合正交试验和响应曲面试验研究了提取温度、提取时间、提取料水比对灵芝多糖提取率的影响。结果表明灵芝多糖提取的最佳工艺为:提取温度84℃、提取时间2h、提取料水比1:28。在此条件下,灵芝多糖的提取率可达1.26%。同时,对超声波以及微波在灵芝多糖提取中的应用进行初探,结果表明超声波和微波都能显著的辅助提高灵芝多糖的提取率。(2)对水浸提法提取的灵芝多糖进行酶解-Sevage法联合脱蛋白的最佳工艺进行了研究,最佳的联合脱蛋白工艺为:木瓜蛋白酶浓度为0.8%;胰蛋白酶浓度为0.8%;链霉蛋白酶浓度为1.0%;各自酶解时间为4h;脱蛋白次数为3次;多糖蛋白脱除率为99.64%。(3)脱蛋白多糖透析后经DEAE-52线性梯度洗脱分离后得到一个主要组分,根据主峰对应的洗脱液的浓度,使用0.1和05mol/L的NaC]溶液对其阶段性梯度洗脱即可将主要多糖组分洗脱下来。(4)DEAE-52线性梯度洗脱分离后得到的一个主要组分,经葡聚糖G-150凝胶层析后显单一对称峰,初步表明该组分为纯品,同时该组分经紫外扫描,在260nm和280nm处无吸收峰,说明多糖组分中的蛋白已除尽。(5)通过对纯化后的灵芝多糖红外光谱的特征吸收进行解析,结果表明灵芝多糖含有羧基,是一种酸性多糖,具有典型的多糖特征峰。(6)结合热水浸提、Sevage法脱蛋白、离子交换柱层析法分级纯化及透析等相结合,可将灵芝中除多糖成份外其它成分除去,从而得到成分较为明确、纯度较高的灵芝多糖,配制成的灵芝多糖注射剂,经理化检测符合注射剂的质量标准要求。(7)灵芝多糖注射剂经豚鼠静脉注射过敏性试验,表现为致敏反应为阴性,初步表明符合注射剂过敏性安全性评价要求。(8)灵芝多糖注射剂可明显延长小鼠负重游泳时间,高剂量对小鼠负重游泳时间延长了85.8%,表明灵芝多糖注射剂对小鼠抗疲劳具有显著的提高作用。同时,灵芝多糖注射剂对小鼠体重的增长无显著影响。