第一部分低剂量环磷酰胺治疗尖锐湿疣患者疗效研究目的：探讨低剂量环磷酰胺治疗尖锐湿疣的疗效。方法：选取86名患有较大尖锐湿疣的患者,常规激光治疗消除皮损。然后随机将这些患者分为三组。第一组52人,为低剂量环磷酰胺治疗组,接受50mg环磷酰胺口服治疗,每天一次,持续一周。另一组26人,为安慰剂组,使用安慰剂治疗。第三组8人,为高剂量环磷酰胺治疗组,这组患者在激光治疗后给予高剂量环磷酰胺(200mg每天,服用一周)治疗。之后对这些患者进行定期随访,观察患者的复发情况。结果：低剂量环磷酰胺治疗组中,在最初的6周内无任何人复发,而后出现的9例复发患者经过再一次为期一周的单纯低剂量环磷酰胺的治疗后,7人完全康复并且没有出现再次复发。在安慰剂组中,最迟八周以内,有21例患者复发,复发率达81%。高剂量环磷酰胺治疗组中的患者使用激光和高剂量环磷酰胺治疗后,8周内有6人复发。结论：通过经常规激光治疗后口服低剂量环磷酰胺的方法来治疗较大尖锐湿疣的患者能取得良好的疗效,即用低剂量环磷酰胺能有效阻止较大尖锐湿疣患者激光治疗后的复发。第二部分低剂量环磷酰胺治疗尖锐湿疣患者的机制及安全性初步探讨目的：1、探讨低剂量环磷酰胺治疗尖锐湿疣患者的免疫机制；2、探讨低剂量环磷酰胺治疗尖锐湿疣患者的安全性。方法：1、选取低剂量组、高剂量组及安慰剂组患者各8例,健康志愿者6例,分别抽取外周血检测其Treg细胞及总T细胞和NK细胞的数量。2、选取低剂量组、安慰剂组患者各6例,抽取外周血检测患者T细胞增殖情况、HPV特异性T细胞增殖情况及细胞特异性杀伤情况；检测NK细胞经IL-2和IL-12刺激后产生IFN-γ的水平即NK细胞活性及经IL-2刺激后作为效应细胞其对K562细胞和HPV感染细胞的细胞毒性分析。3、选取36名HPV-6型感染的较大生殖器疣患者。激光治疗后用小刮匙小心刮取治疗区域周围的上皮组织。用实时荧光定量PCR技术检测HPV-DNA含量。然后随机将上述激光治疗组患者分为两组,24名患者接受低剂量环磷酰胺治疗,12名患者接受安慰剂治疗7天。14天后,在相同区域取样测量HPV-DNA含量。4、激光治疗后分别用低剂量环磷酰胺(n=18)和安慰剂(n=14)治疗7天。三周后收集外周血样本。测定血清中抗ds-DNA抗体、类风湿因子(包括抗IgM,IgG和IgA的自身抗体)的水平及,同时检测患者谷丙转氨酶和肌酐水平。结果：1、激光治疗后尖锐湿疣患者体内的CD3+CD4+FOXP3+Treg细胞的数量与健康受试者相当；与对照组相比,经过低剂量环磷酰胺治疗后患者体内的Treg细胞数量在百分比和绝对数两项中都显著下降；高剂量环磷酰胺组体内的Treg细胞数量亦明显下降。低剂量环磷酰胺组与对照组外周血中的CD3+T淋巴细胞和CD3-CD56+NK细胞的总量无明显差异；而高剂量环磷酰胺组外周血中的CD3+T淋巴细胞和CD3-CD56+NK细胞的总量较对照组明显下降。2、经抗CD3和CD28抗体刺激后低剂量环磷酰胺治疗组外周血T细胞增殖比对照组活跃；低剂量环磷酰胺治疗组中HPV特异性T细胞增殖活性和细胞毒性比对照组均增强。相对于对照组而言,低环磷酰胺治疗组患者外周血NK细胞受IL-2和IL-12刺激后产生了更多的IFN-γ；低剂量环磷酰胺治疗组患者外周血NK细胞经IL-2预刺激后对NK细胞敏感的K562细胞和HPV感染细胞的细胞溶解作用较对照组增强。3、经激光治疗后,36个患者的激光治疗区域周围的表皮中病毒DNA的含量相近。但是经过14天的低剂量环磷酰胺治疗(n=24)和安慰剂治疗(n=12)后,仅在安慰剂治疗组中发现了大量的病毒复制,而在21个环磷酰胺治疗患者中几乎检测不到HPV-DNA,其他3个治疗患者中也仅检测出少量的HPV-DNA。4、低剂量环磷酰胺治疗3周后患者的血清中抗dsDNA水平、类风湿因子的3个子类(包括IgM,IgG和IgA)的自身抗体的含量及谷丙转氨酶和肌酐水平与安慰剂组相比并没有增高。结论：低剂量环磷酰能选择性消减患者体内有免疫抑制作用的Treg细胞；用低剂量环磷酰胺治疗尖锐湿疣患者不会导致其发生自身免疫反应,亦无明显的肝肾毒性。