论文部分内容阅读
研究目的检测miR-935在胰腺癌组织及细胞中的表达情况,并研究其对胰腺癌细胞增殖、迁移、凋亡的影响。预测miR-935作用的直接靶基因,并探讨其影响胰腺癌细胞恶性生物学行为的作用机制。研究方法(1)收集新鲜胰腺癌组织及癌旁正常组织标本,选取正常胰腺导管HPDE6-C7细胞及胰腺癌PANC-1细胞进行培养;(2)以实时定量PCR(Real-time PCR)方法测定胰腺癌组织及胰腺癌PANC-1细胞中miR-935表达情况;(3)利用生物学信息学数据库预测miR-935直接靶基因,并应用荧光素酶基因报告实验验证靶基因的合理性;(4)分别应用miR-935类似物,mir-935抑制物和miR-935拮抗物对胰腺癌PANC-1细胞进行转染,MTT法及克隆形成法检测转染细胞增殖情况、Transwell法检测转染细胞迁移能力、流式细胞仪检测转染细胞凋亡情况、通过qRT-PCR及Western blot检测P21、P27、EMT相关分子及凋亡相关分子在转染细胞中的表达情况、沉默靶基因表达以探讨miR-935与靶基因之间的调控方式。结果(1)与正常胰腺组织相比,miR-935在胰腺癌组织中表达显著上调,而INPP4A的表达显著下调;(2)与正常胰腺导管HPDE6-C7细胞相比,miR-935在胰腺癌PANC-1细胞中表达显著上调,而INPP4A的表达显著下调;(3)胰腺癌PANC-1细胞转染miR-935抑制物后,miR-935表达被明显抑制,表达下调的miR-935显著抑制细胞的增殖、迁移,并促进诱导细胞的凋亡;(4)miR-935表达抑制导致P27表达水平显著上调;导致EMT相关分子表达水平显著变化:E-cadherin的表达水平明显上调,N-cadherin、Snail和Vimentin的表达水平均明显下调;导致凋亡相关分析表达水平显著变化:Bax的表达水平明显上调,Bcl-2、pro-caspase-3及active-caspase-3的表达水平明显下调;(5)胰腺癌PANC-1细胞转染miR-935类似物后,miR-935表达被明显上调,表达上调的miR-935显著促进细胞的增殖、迁移,并抑制诱导细胞的凋亡;(6)miR-935表达上调导致P27表达水平显著下调;导致EMT相关分子表达水平显著变化:E-cadherin的表达水平明显下调,N-cadherin、Snail和Vimentin的表达水平均明显上调;导致凋亡相关分析表达水平显著变化:Bax的表达水平明显下调,Bcl-2、pro-caspase-3及active-caspase-3的表达水平明显上调;(7)INPP4A是miR-935直接作用靶基因。沉默INPP4A表达显著抵消了miR-935表达抑制对胰腺癌PANC-1细胞迁移及凋亡的抑制作用;也显著抵消了miR-935表达抑制对EMT及凋亡相关分子表达水平的影响。结论miR-935在胰腺癌组织及胰腺癌PANC-1中均有表达,上调miR-935表达水平可以促进胰腺癌细胞增殖及迁移能力,并抑制细胞凋亡。miR-935可能通过直接作用于靶基因INPP4A调控胰腺癌细胞恶性生物学行为。miR-935及INPP4A可能能成为胰腺癌基因治疗的潜在靶点。