【摘 要】
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该论文以检测SRY单拷贝基因为模式,就利用孕妇外周血中胎儿细胞进行产前诊断的方法进行了研究,概述如下:1、孕妇外周血中SRY单拷贝基因的检测:采用套式PCR技术对74例孕7-40周
【出 处】
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中国人民解放军军医进修学院 解放军总医院 解放军医学院 军医进修学院
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该论文以检测SRY单拷贝基因为模式,就利用孕妇外周血中胎儿细胞进行产前诊断的方法进行了研究,概述如下:1、孕妇外周血中SRY单拷贝基因的检测:采用套式PCR技术对74例孕7-40周的孕妇外周血DNA进行了SRY单拷贝基因的检测,结果在38例怀男胎的孕妇中,孕早、中、晚期的检出率分别为50%(10/20)、73%(8/11)、71%(5/7),提示:1)胎儿细胞在孕早期即存在于孕妇外周血中;2)直接利用孕妇外周血中胎儿细胞检查SRY基因的检出率较低,但检出率随孕龄的增加而增加;2、密度梯度离心法富集胎儿幼稚红细胞:采用密度梯度离心法对24例孕妇外周血中胎儿幼稚红细胞进行富集,并以FCM技术对富集细胞进行鉴定,同时对富集前后孕妇外周血DNA进行SRY基因检测,结果表明:1)富集前GPA阳性细胞平均含量为0.02‰-0.1‰,而富集后平均含量高达0.5%-2.8%;2)24例孕妇中,13例怀男胎孕妇外周血DNA富集前SRY基因的检出率为69%(9/13),而富集后检出率增加为85%(11/13).因此认为密度梯度离心法可用于富集胎儿细胞,而且方法简单、快速、易于掌握;3、利用PCR-ELISA方法检测SRY基因的方法学研究和临床应用:(1)PCR-ELISA方法学的研究:以生物素和荧光素分别标记SRY一对内引物,利用亲和素和生物素特异结合的特性将PCR产物固定于酶标板上,最后通过OD值来判断样品中是否含有SRY基因,同时摸索反应条件并建立最佳反应体系,并通过模拟怀男胎孕妇外周血将男性DNA以女性DNA稀释来检测该系统的灵敏性,结果表明就用该方法可从10<6>个女性细胞中检出1个男性细胞;(2)PCR-ELISA方法检测SRY基因:对24例孕妇富集前后外周血DNA进行SRY基因检测,同时与PCR-电泳方法进行比较.结果表明:24例孕妇中,13例怀男胎的孕妇应用PCR-ELISA方法和PCR-电泳方法富集前的检出率分别为85%(11/13)、69%(9/13);富集后的检出率分别为92%(12/13)、85%(11/13).因此认为PCR-ELISA方法优于PCR-电泳方法.
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