【摘 要】
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链霉菌FR-008聚酮合酶(PKS)基因簇负责七烯大环内酯抗真菌抗生素杀假丝菌素(FR-008)的生物合成,将这个巨大的基因簇转入植物以探索产生抗真菌植物品种的可能性是研究 人员深
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链霉菌FR-008聚酮合酶(PKS)基因簇负责七烯大环内酯抗真菌抗生素杀假丝菌素(FR-008)的生物合成,将这个巨大的基因簇转入植物以探索产生抗真菌植物品种的可能性是研究 人员深入研究杀假丝菌素生物合成基因簇的长远目标之一.为探索在植物中表达极高G+C含 量的PKS基因的可能性,构建了携带有编码FR-008Ⅰ型PKS模块氨基端部分的基因的表达质粒,包括一个酮基合酶(KS)和部分酰基转移酶(AT)活性结构域.该载体携带有花椰菜花叶病毒35S RNA的启动子以指导PKS的表达.由于载体中2.7Kb的PKS基因编码了两种酶活性的结构域而不是完整的的Ⅰ型PKS模块,因此研究人员目前并不期望这个截短的PKS基因在植物能产生抗真菌活性.为在大肠杆菌超量表达该2.7kb PKS基因所编码的两个功能结构域,构建了具 有不同启动子组合的PKS表达质粒.其中一些可超量表达具有预期分子量的PKS蛋白.进一步截短的基因可以表达预期大小的50kDa蛋白,表明这些超量表达的蛋白是由克隆在质粒上的PKS基因所编码.接着将大肠杆菌表达的PKS作为抗原制备与天然FR-008 PKS对应的多克隆抗 体.蛋白质印迹实验显示,部分提纯的抗体样品与大肠杆菌中表达的PKS蛋白有特异性反应 .同时,这些抗体也可与天然存在于链霉菌FR-008 PKS基因是正确的读码框架克隆和表达的;同时也表明抗血清对天然的FR-008 I型PKS具有特异性.利用抗体检测PKS的检出极限比考马斯亮蓝染色高1000倍,应可用于检测植物中低水平的PKS表达.
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