【摘 要】
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目的:构建干扰SPARC基因表达和过表达载体,转染人骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株SKM-1细胞,探讨SPARC基因差异性表达对人MDS细胞株SKM-1细胞增殖凋亡的影响。方法:以SPARC-RNAi-
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目的:构建干扰SPARC基因表达和过表达载体,转染人骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株SKM-1细胞,探讨SPARC基因差异性表达对人MDS细胞株SKM-1细胞增殖凋亡的影响。方法:以SPARC-RNAi-LV,pcDNA-SPARC为模板的引物用PCR扩增SPARC基因,将靶基因克隆入慢病毒载体,构建含有SPARC基因的重组慢病毒载体SPARC-RNAi-LV, pGC-GV-SPARC,测序检测正确性;将构建载体转染人MDS细胞株SKM-1,流式细胞术检测转染效率,RT-PCR检测SKM-1细胞中SPARC mRNA表达,Western blot检测SPARC蛋白表达,MTS法测定细胞增殖及小剂量阿糖胞苷(30ng/ml)对过表达实验组增殖抑制的影响,Annexin V检测SPARC基因转染后或过表达组加阿糖胞苷后对人SKM-1细胞凋亡的影响。结果:构建含有SPARC基因的重组慢病毒载体转染效率60%左右,转染后SPARC mRNA及蛋白表达在靶细胞中较对照组均有明显改变。小剂量阿糖胞苷作用于SPARC过表达组对转染组的增殖抑制率明显高于其他组。SPARC基因转染后人SKM-1细胞凋亡率较未转染组明显,SPARC过表达组加入阿糖胞苷后人SKM-1细胞凋亡率较对照组显著增高。结论:成功构建了携人SPARC基因的慢病毒载体,转染人SKM-1细胞株后稳定表达SPARC基因,SPARC的改变可影响细胞增殖,此外SPARC过表达联合小剂量阿糖胞苷(30ng/ml)更有效抑制SKM-1细胞增殖并诱导其凋亡。
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