影响早熟油桃(Prunus persica var.nectaria)叶片产生胚性愈伤组织的研究

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本研究以早熟油桃品种“华光”、“曙光”为试材,研究外源植物生长调节剂种类及其浓度组合、培养基类型、暗培养时间、光照强度、温度等因素对油桃叶片诱导胚性愈伤的影响;在筛选的培养基上培养“华光”的有效愈伤组织,观察不同时期愈伤组织的发育状态,研究不同培养基对愈伤组织发育的影响。通过对愈伤组织外观状态以及部分愈伤组织细胞结构的观察,初步探索了愈伤组织不定芽诱导的发生途径。研究结果如下:1.通过对影响早熟油桃叶片产生胚性愈伤的基本培养基、外源激素、碳源、环境(光照强度、温度、暗培养时间)等因素进行研究表明:碳源种类对诱导胚性愈伤影响不明显,其他影响因子对油桃叶片胚性愈伤的诱导均显著。其中叶背横切,叶面接于G+2.5mg/l BA+0.5mg/l IBA培养基上,暗培养21d,转入1/2MS+2.0 mg/l TDZ+2.0 mg/l BA+0.5mg/l NAA的培养基中,温度控制在24-27.5℃,光照强度为2000lx时,愈伤组织发育良好,获得高频胚性愈伤,进一步分化产生8%的不定芽。2.通过对不同时期不同培养基培养的愈伤组织细胞结构的观察发现,在愈伤组织的发育初始,激素组合对其影响作用较大;在愈伤组织的发育后期,基本培养基对愈伤发育影响显著。通过对不同时期不同培养基培养的愈伤组织外观形态的观察发现,基本培养基是影响愈伤组织外观形态变化的主要原因。3.通过对愈伤组织外观状态以及部分愈伤组织细胞结构的观察发现,暗培养21d的黄白色有效愈伤,其近表层细胞变小,排列紧密,转入1/2MS+2.0 mg/l TDZ+2.0 mg/l BA+0. 5mg/l NAA分化培养基中进行光培养。7d时,光滑平整的愈伤组织表面长出许多大小不一的瘤点,愈伤组织颜色为淡绿色,此时的愈伤组织细胞核变大,细胞排列非常分散。14d时,在外植体切口附近出现大量愈伤组织,其颜色为黄绿色,愈伤组织细胞排列比较分散,可看到细胞的有丝分裂,在细胞团的中间出现空心。21 d时,愈伤组织外观变化不明显,观察其细胞结构发现,组织细胞变大,细胞排列整齐。28d时,愈伤组织颜色逐渐变为淡黄色,愈伤组织细胞聚集紧凑,中间的空心区变得更大,此时的部分愈伤组织有白色绒状物出现。之后转接愈伤,愈伤组织的白色绒状物加厚,在白色绒状物的顶端出现不定芽点,转入不含生长素的培养基可获得不定芽。
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