近年来,由于人类活动和自然环境的转变,珊瑚生态系统失衡问题越来越严重,白化范围越来越广。为了探究珊瑚应对自然胁迫的抗逆机制,本实验对稀杯盔形珊瑚的热休克蛋白HSP90进行克隆并对温度胁迫下其表达规律进行分析,丛生盔形珊瑚抗氧化基因铁蛋白Ferritin、铜锌超氧化物歧化酶基因CuZnSOD进行克隆与原核表达研究。主要结果如下:1.利用RT-PCR和RACE方法克隆获得稀杯盔形珊瑚热休克蛋白HSP90基因部分序列2568bp,内含一个ATPase功能结构域,一个HSP90功能结构域和一个多肽结合域。应用实时荧光定量PCR技术分析其在胁迫温度29℃,32℃,35℃时不同时间(1h、3h、6h、12h、24h、36h、48h、60h)的转录水平,发现其表达呈现先上升后下调的规律,上升反应时间、最大表达量及下降速率均受温度的影响,温度越高,所需反应时间越长,最大表达量越大,下降速率也越大。2.利用PCR技术获得丛生盔形珊瑚铁Ferritin基因cDNA序列680bp,ORF为519bp,编码一条含172个氨基酸的多肽。运用PET-32a载体和BL21(DE3)菌株构建了铁蛋白原核表达系统,诱导表达分子量大小约41kDa的特异性融合蛋白。对表达条件进行优化发现,在IPTG浓度为0.7mmol/L,温度为32℃时诱导可最高效表达融合蛋白,表达量随时间的增加而累积,6h获得最大量的融合蛋白。3.利用PCR技术获得丛生盔形珊瑚铁CuZnSOD基因cDNA644bp,ORF为471bp,编码一条含156个氨基酸的多肽。运用PET-32a载体和BL21(DE3)菌株构建CuZnSOD蛋白原核表达系统,诱导表达分子量大小约37kDa的特异性融合蛋白。对表达条件进行优化发现,在IPTG浓度为0.4mmol/L,温度为32℃可最高效表达融合蛋白,表达量随时间的增加而累积,6h获得最大量的融合蛋白。