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课题组前期研究发现，水分胁迫或脱落酸(ABA)处理能够诱导花生AhNAC2的表达。过表达AhNA C2能够增加转基因拟南芥对ABA超敏感性和抗旱性。从花生克隆的AhNCED1基因上游启动子序列中，含有多个NAC响应元件。酵母单杂交实验与体外凝胶迁移实验(EMSA)证实AhNAC2可以结合AhNCED1启动子;染色质免疫共沉淀(ChIP)分析表明AhNAC2能够与AhNCED1启动子结合。AhNAC2过表达会抑制转基因拟南芥Conl-1(pAhNCED1∷GUS/Col)的GUS活性。基于以上结果，本文将主要探讨AhNAC2蛋白不同区段的功能以及对AhNCED1基因启动子活性的影响，为更好地认识转录因子AhNAC2作用机理提供依据。获得的主要结果如下: 1.同源比对分析AhNAC2蛋白，发现在蛋白N端区域高度保守，在C端存在比较保守的区域。依据保守区域的位置对AhNAC2进行分段设计，并相应地构建4个AhNAC2缺失蛋白植物超表达载体，分别带有不同片段(N1:AhNAC2的N1-186aa端;N2: C187-348aa端;N3:N端连接C端A187-255aa部分;N4:N端连接C端B256-348aa部分），然后分别转化转基因拟南芥Conl-1，筛选获得转基因拟南芥的纯合株系。 2.Real-time PCR检测各转基因植株目标基因的表达量，用高表达量株系开展后续实验。GUS染色分析表明AhNAC2蛋白的N端对AhNCED1启动子具有抑制作用，但是相对AhNAC2蛋白其抑制强度较弱;AhNAC2蛋白的C端则没有抑制作用;AhNAC2蛋白的N端连接区域A后，减弱了对AhNCED1启动子抑制效果，而连接序列B后抑制效果不变。 3.培养基中添加不同浓度的ABA处理NF、N1、N2、N3和N4转基因植株，测定种子的萌发率、绿胚率和根伸长率，结果表明NF植株对外源ABA敏感性最强，N1和N4植株其次，N2和N3植株最不敏感。 4.在拟南芥原生质中瞬时表达AhNAC2各分段与GFP融合蛋白，激光共聚焦显微镜分析NF、N1、N2、N3和N4的亚细胞定位，结果表明，NF、N1和N4定位细胞核，N2和N3分布在整个细胞。NF、N1、N2、N3和N4在转基因幼苗根尖中的亚细胞定位结果与瞬时表达一致。分析AhNAC2各分段蛋白的酵母转录活性的结果表明，NF、N2和N4具有转录活性。 5.分析AhNCED1启动子上的NACRE元件和其它响应元件，按元件依次减少的方法将启动子分为10个片段。瞬时表达分析AhNCED1启动子各片段对外源ABA的响应，结果表明片段2(-308bp—-lbp)和5(-820bp—-lbp)能够响应ABA处理，分别抑制和促进启动子的活性。瞬时表达分析AhNAC2各分段对AhNCED1启动子活性影响，结果表明NF降低AhNCED1启动子（全长）的活性，N1和N4其次，N2和N3抑制效果最弱;NF、N1、N2、N3和N4对AhNCED1启动子分段5(-820bp—-lbp)的影响与全长不同。 综上推测，AhNAC2蛋白的N1-186aa区域(N1)是蛋白核定位和转录抑制活性的关键区域，单独C端的A187-255aa区域可能抑制N端的核定位，而B256-348aa区域可能缓解了这种抑制效果。AhNAC2蛋白的N端区域对AhNCED1启动子活性的抑制起到主要作用。这些结果为全面认识AhNAC2的功能提供基础。