【摘 要】
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目的本研究探讨二甲胺四环素活化后的小胶质细胞在脊髓损伤小鼠神经功能恢复中能否起到一定的促进作用,为脊髓损伤的治疗提供了新的思路与理论依据。方法将小胶质细胞分为实验组和对照组,实验组用10mmol/L二甲胺四环素处理小胶质细胞24h,用免疫荧光及流式鉴定其分化,对照组不进行特殊处理。实验组与对照组小胶质细胞分别与背根神经元细胞进行共培养24h,观察背根神经元细胞轴突生长情况,分别取上清液用酶联免疫吸
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目的本研究探讨二甲胺四环素活化后的小胶质细胞在脊髓损伤小鼠神经功能恢复中能否起到一定的促进作用,为脊髓损伤的治疗提供了新的思路与理论依据。方法将小胶质细胞分为实验组和对照组,实验组用10mmol/L二甲胺四环素处理小胶质细胞24h,用免疫荧光及流式鉴定其分化,对照组不进行特殊处理。实验组与对照组小胶质细胞分别与背根神经元细胞进行共培养24h,观察背根神经元细胞轴突生长情况,分别取上清液用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定细胞标记物的表达。将96只6周小鼠随机分成空白对照组,单纯脊髓损伤组,未活化组和活化组,每组各24只:采用钳夹法对单纯脊髓损伤组,未活化组和活化组进行T10脊髓损伤模型构建,建模成功后,未活化组植入未经二甲胺四环素活化的小胶质细胞,空白对照组进行单纯椎板切除,不进行其他处理。在建模后第1d,7d,14d,28d采用BMS评分法对运动功能进行评估。四组小鼠于第4w处死,取脊髓组织固定,包埋,冷冻,冰冻切片,空白对照组、单纯脊髓损伤组和活化组小鼠分别进行HE染色,观察各组脊髓组织形态学变化。四组切片分别进行免疫荧光染色,测定小胶质细胞存活,分化情况及神经纤维恢复情况。结果免疫荧光显示,实验组的M1型小胶质细胞标记物i NOS表达明显低于对照组,同时实验组的M2型小胶质细胞标记物ARG1表达明显高于对照组。流式结果显示,实验组的M1型小胶质细胞标记物CD16/32表达明显低于对照组,实验组的M2型小胶质细胞标记物CD206表达明显高于对照组。经过24h共培养后,实验组背根神经元细胞轴突生长的长度及数量均明显强于对照组。取上清液进行ELISA测试,测试结果显示实验组上清液中M1型小胶质细胞标记物IL-6明显低于对照组,实验组上清液中M2型小胶质细胞标记物IL-10明显高于对照组。建模后1d,小鼠的运动功能学评分在单纯脊髓损伤组,未活化组和活化组组间无统计学差异（P>0.05）,空白对照组评分明显高于其他三组（P<0.05）。建模后14d和28d,活化小胶质细胞组小鼠运动功能学评分明显高于单纯脊髓损伤组和未活化组（P<0.05）。建模后4w时,HE染色显示,空白对照组小鼠脊髓组织无明显坏死组织细胞,组织形态结构学正常,少量炎性细胞浸润;单纯脊髓损伤组小鼠脊髓组织切片可见大量坏死的组织空洞,组织形态结构学紊乱;活化组小鼠脊髓组织切片可见可见少量组织空洞,组织形态结构较为规律,坏死程度低于单纯脊髓损伤组,但高于空白对照组。免疫荧光显示,未活化组和活化组于4w均有移植的存活小胶质细胞;神经纤维恢复情况与小鼠运动功能恢复情况呈正相关,4w时空白对照组均优于活化组,活化组均优于未活化组和单纯损伤组。结论该研究证明了通过二甲胺四环素活化小胶质细胞可促使其向M2型分化,并且通过移植二甲胺四环素活化后的小胶质细胞可有效促进脊髓损伤后的小鼠的神经功能恢复。
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