贵州省安顺地区蛇源裂头蚴组织结构观察及分离株的分子鉴定

来源 :贵阳医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nathon_zhwang
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目的: 观察贵州省安顺地区蛇源裂头蚴虫株的组织结构特点,对分离株进行分子鉴定及种系发育关系的分析。  方法: 采集安顺地区不同蛇源裂头蚴,分别作10%福尔马林及70%乙醇固定。HE染色裂头蚴,进行组织观察和图像采集,并与蛙株裂头蚴的组织结构进行对比。提取全虫 DNA,PCR扩增 ITS1和cox1基因,所得PCR扩增产物经测序鉴定后,从GenBank获取相应的基因序列,采用BLAST、Clustalx1.81生物分析软件进行多重比对序列分析,并应用软件MEGA6.0构建系统发育树(邻位连接法)。  结果: ①裂头蚴虫体前、后端略膨大,不分节,体表有许多环形皱褶。由于颈部较短而粗,使得前端经颈部到体段的转变区域不明显。顶端中央有一孔向内凹陷成隧道状,向后延长一定距离后形成盲端。虫体结构无体腔,体壁由皮层和皮下层组成。微毛位于皮层的外表面,遍布整个虫体。实质区有肌纤维层、皮层细胞、实质细胞、排泄系统和石灰小体等。②成功扩增出8株裂头蚴的ITS1和cox1基因序列,ITS1大小为822~863bp,cox1大小为404~415bp,与预期的基因片段大小一致。基于ITS1和cox1基因序列构建的种系发育树与所有的猬迭宫绦虫均构成同一亚群,总分支的自展值为高于50%,二者在不同的分离株之间呈现基因多态性。对8株裂头蚴ITS1和cox1序列的同源性进行比较,ITS1的同源性为70.27%~82.84%,而cox1的同源性为95.63%~99.50%,显示cox1的同源性高于ITS1。已向GenBank提交ITS1和cox1新序列各一个,获得登录号为KF990161和 KJ418421。  结论: ①组织结构观察和基因序列比对鉴定所取得蛇源裂头蚴为猬迭宫绦虫;②在HE染色的组织结构观察水平上,区分不同裂头蚴分离株是困难的,但却有助于裂头蚴病的诊断及防治等的后续性研究;③研究结果表明,不同蛇源裂头蚴分离株之间存在基因多态性,从总分支的自展值来看,cox1比ITS1更适合用于种内遗传多态性研究,ITS1适合做定种的分子标记。
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