离体加倍创造欧李多倍体种质及其鉴定

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本试验以欧李“农大7号”的组培苗茎尖和种子的种胚为试验材料,采用接种法和浸泡法对材料进行处理。以秋水仙素为诱变剂,用不同浓度的秋水仙素进行不同时间的处理,研究欧李多倍体的诱导方法。采用形态学观察、流式细胞仪检测、染色体计数等方法对诱导的材料进行倍性鉴定,并对变异植株的生理指标进行测定,研究其与二倍体植株在生理指标上存在的差异。主要研究结果如下:1.采用种子的种胚为诱导材料,直接接种到添加有不同浓度秋水仙素的MS培养基中,随着秋水仙素的浓度的提高,种胚的成活率逐渐降低,疑似变异率先升高后下降,培养基中秋水仙素的浓度为80mg/L时,种胚的疑似变异率最高,为30%。2.采用欧李组培继代苗的茎尖为诱导材料,分别用浸泡法和直接接种法处理。随着浸泡的浓度和时间增长,茎尖的死亡率增高,当秋水仙素浓度为0.6%,且处理时间为48h±24h时,茎尖的疑似变异率较高。直接接种到含有不同浓度秋水仙素培养基上,当秋水仙素的浓度达到80mg/L时,疑似变异率最高,为30%。3.采用流式细胞仪对疑似变异的组培苗进行倍性鉴定。对50个疑似变异的材料进行鉴定,结果检测出4个样品为四倍体。将上述的4个样品做染色体制片研究:用幼嫩的组培苗根尖,0.002mol/L的8一羟基喹啉预处理2.5h,在温度为60±1℃的HCI中解离15min,可获得较为清晰的染色体图片。经鉴定4个样品的均为四倍体,染色体数为2n=4x=32。4.变异的组培苗表现出叶片变大,为对照组的3.46倍;叶片颜色变深;茎段分化能力和生根能力强,均为对照组的2.1倍;叶片气孔变大,是对照组的5.1倍;气孔长直径/短直径比值为对照组的50%,气孔形状偏圆;单位面积气孔数少,为对照组的40%。5.优化SSR分子标记体系,对“农大7号”和鉴定的4个四倍体材料进行标记,分析得出其中1个样品的标记条带与“农大7号”条带相同,可能为茎尖加倍的四倍体,其余3个为种子加倍的四倍体。6.测定4个样品的生理特性,发现四倍体较二倍体的光合色素含量高,但SOD、POD、 CAT酶的活性较二倍体低,MDA含量较二倍体低。
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