论文部分内容阅读
背景和目的：巨噬细胞在恶性肿瘤的基质成分中占重要地位，能对不同肿瘤的刺激作出反应，释放不同成分的生长因子、细胞因子、趋化因子和酶等，来调节肿瘤的生长，血管和淋巴管发生，以及肿瘤的浸润和转移。研究表明，在某些实体性肿瘤如乳腺癌、肺癌等肿瘤组织中，肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associatedmacrophages，TAMs)不仅不能清除肿瘤，反而可能抑制机体免疫应答，在肿瘤的发生和发展过程中起了“帮凶”的作用，TAMs浸润水平较低的肿瘤患者具有较低的复发率和较长的存活期；然而在胃癌和结直肠癌的研究中得出了相反的结论，认为TAMs的浸润与病人预后呈正相关。本文研究鼻咽癌(NasopharyngealCarcinoma，NPC)组织中TAMs浸润与肿瘤血管生成以及临床进展和预后的关系。
材料和方法：1.体外实验将人外周血巨噬细胞株与NPC细胞株CNE-1、CNE-2的上清液共培养，发立阳性对照(肺癌细胞株95D)和阴性对照组。用酶联免疫吸附试验(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay，ELISA)检测巨噬细胞分泌细胞因子IL-10和肿瘤坏死因子TNF-α的表达；用WesternBlot检测NPC细胞株CNE-1和CNE-2及巨噬细胞中LYVE-1的表达。观察NPC细胞株CNE-1和CNE-2上清液与巨噬细胞共培养后释放细胞因子TNF-α和IL-10与阳性对照组及阴性对照组的区别。
2.临床实验用免疫组化技术，对NPC组织样本60例，以及NPC原发肿瘤和颈部淋巴结转移癌配对NPC病例18例，分别检测TAMs标记物(CD68)、淋巴管生成诱导因子(VEGF-C)、淋巴管上皮细胞标记物(LYVE-1)、血管上皮标记物(CD31及CD34)等五项标记物在NPC肿瘤组织中的表达。分析60例NPC样本的临床病理表现及5项标记物的表达与患者预后的关系；分析TAMs在NPC组织中的表达与肿瘤血管、淋巴管生成的关系；分析VEGF-C和LYVE-1在NPC原发癌和对应的淋巴结转移癌组织中的表达差异。
结果：1.临床病理资料60例NPC病例包括男性38例、女性22例；年龄12～68岁，平均44岁；临床分期(TNM)Ⅰ期3例(5％)，Ⅱ期12例(20％)，Ⅲ期26例(43.3％)，Ⅳ期19例(31.7％)。所有病例确诊后均在我院完成规范治疗后，治疗效果分为2个等级：治愈42例(70％)，未愈18(30％)。病人随访时间5～54月不等，患者的预后分为3个等级：Ⅰ级，未复发42例(70％)；Ⅱ级，复发或颈部淋巴结转移7例(11.7％)；Ⅲ级，远处转移或死亡11例(18.3％)。
18例NPC原发肿瘤和颈部淋巴结转移癌配对鼻咽病例，包括男性12例、女性6例；年龄23～76岁，平均48.3岁。
2.巨噬细胞与NPC细胞株上清液共培养后TNF-α和IL-10的表达巨噬细胞与NPC细胞株CNE-1、CNE-2的上清液共培养后，其形态与正常巨噬细胞相比未发生明显改变，巨噬细胞受刺激后分泌TNF-α较少，但经脂多糖(LPS)活化后明显增多；分泌IL-10较少，经LPS活化后升高不明显，上述细胞因子与空白对照组之间无明显区别。相反，巨噬细胞与肺癌细胞株95D上清液共培养后，形态变化明显，细胞异型性增加，并产生明显的细胞集落；巨噬细胞分泌TNF-α减少，经LPS活化后无明显改变；而分泌IL-10增多，经LPS活化升高更加明显。
3.NPC组织中TAMs浸润与临床病理变化的关系CD68+TAMs大量浸润于肿瘤实体及周围间质中，在肿瘤间质成分中占很大的比例，形成明显的TAMs集落，即“TAMs热区”。“TAMs热区”密度值越大，患者的预后趋向越好，TAMs的浸润与患者预后呈正相关(LogisticRegression分析，P＜0.05)；TAMs热区密度与淋巴管生成相关标记物VEGF-C和LYVE-1表达未见明显相关(SpearmanCorrelations分析，P＞0.05)；TAMs热区密度与血管标记物CD31和CD34的表达未见明显相关(PearsonCorrelations分析，P＞0.05)。
4.NPC组织血管、淋巴管生成与临床病理变化的关系NPC组织中癌细胞呈VEGF-C胞浆阳性表达，阳性率86％；NPC组织中癌细胞呈LYVE-1胞浆阳性表达，阳性率100％，且Westernblot检测显示NPC细胞株CNE-1和CNE-2中有LYVE-1的表达，巨噬细胞中无LYVE-1的表达；所有NPC癌组织和邻近间质中见血管腔CD31和CD34阳性表达，部分癌细胞胞浆呈CD31阳性表达。NPC组织中VEGF-C、LYVE-1、CD31和CD34的表达均与患者的预后未见明显相关(LogisticRegression分析，P＞0.05)；NPC组织VEGF-C、LYVE-1的表达与淋巴结中转移癌组织LYVE-1的表达均呈正相关(SpearmanCorrelations分析，P＜0.05)；而淋巴结中转移癌组织VEGF-C的表达与NPC组织VEGF-C、LYVE-1的表达均无相关(SpearmanCorrelations分析，P＞0.05)。
结论：1.巨噬细胞与NPC细胞株上清液共培养后，其形态未发生明显改变；NPC细胞株上清液诱导的TAMs分泌TNF-α较少，但经LPS活化后明显增多；分泌IL-10很少，经LPS活化后升高不明显。
2.NPC肿瘤癌组织及周围间质中有大量的TAMs浸润，并形成“TAMs热区”；TAMs热区的密度与患者预后呈正相关。NPC组织中TAMs的浸润与血管标记物CD31和CD34、淋巴管标记物VEGF-C和LYVE-1的表达无明显相关性。
3.NPC肿瘤细胞、NPC细胞株CNE-1和CNE-2均存在淋巴管标记物LYVE-1高表达，而正常巨噬细胞中无LYVE-1抗原的表达。NPC组织中VEGF-C、LYVE-1、CD31及CD34的表达与患者预后未见明显相关。
4.NPC组织VEGF-C、LYVE-1的表达与淋巴结中转移癌组织LYVE-1的表达均呈正相关，差异具有统计学意义；而淋巴结转移癌组织VEGF-C的表达与NPC组织VEGF-C、LYVE-1的表达均无统计学意义。