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本实验首次对邯邢铁矿矿区7个采样点3 类不同样品宏基因组DNA 提取方法进行了探索,初步建立了铁矿矿区不同样品的宏基因组DNA 提取方法。结果表明:选矿水和矿坑水样品中微生物含量太低,不宜过滤后直接提取,可采用不同浓度的改良M5’和铁矿浸汁培养基增菌后混合提取宏基因组DNA;原矿和尾矿样品含有大量的金属离子,尤其是铁离子较多,不但会影响溶菌酶的活性,还会影响后续的PCR扩增效率,在提取DNA 前需采用高浓度TE 处理去除金属离子,以解除其抑制作用,再采用SDS-高盐法提取宏基因组DNA;选矿水沉积物样品可采用差速沉降法预处理后直接提取宏基因组DNA。以上方法提取效果较好,所得DNA 能够满足PCR需要。
采用23S rDNA 特异插入/缺失序列(Indel)PCR-TGGE和克隆文库两种非培养方法研究了邯邢铁矿矿区样品中放线菌的多样性。通过TGGE分析结果表明邯邢铁矿矿区样品中放线菌类群比较少,仅有1~4个主要条带,而通过克隆文库技术得到的多样性要高于这个结果,PCR-TGGE法仅能检测到样品中的主要类群,对于丰度低的非主要类群检测灵敏度不够。不同样品阳性克隆子的序列测定和多样性分析表明:同一地点不同类样品中的类群不完全相同,不同地点样品中也存在相同的类群。大部分样品中,主要类群和链霉菌属(Streptomyces)成员同源性最高,还发现了一些其他的类群,分别和诺卡氏菌属(Nocardia),类诺卡氏菌属(Nocardioides),戈登氏菌属(Gordonia)微杆菌属(Microbacterium),节杆菌属(Arthrobacter),韩国生工菌属(Kribbella),棍状杆菌属(Clavibacter),红球菌属(Rhodococcus),束丝放线菌属(Actinosynema),赖氏菌属(Leifsonia),厄氏菌属(Oerskovia)同源性较高。但是得到的序列和已知序列相似性都比较低,最高序列同源性在78.9%~98.5%之间。结合两种方法能够得到更加全面准确的放线菌多样性信息。