【摘 要】
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PCR扩增人孕激素受体(PR)氨基端编码区段,定位克隆连入高效表达载体PMS-31b,构建重组质粒PMS-PRa,将其转化大肠杆菌POP,经30℃扩增和42℃温度诱导,表达出分子量33KD的MS2-PRa
【出 处】
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北京医科大学 北京大学医学部 北京大学
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PCR扩增人孕激素受体(PR)氨基端编码区段,定位克隆连入高效表达载体PMS-31b,构建重组质粒PMS-PRa,将其转化大肠杆菌POP<2136>,经30℃扩增和42℃温度诱导,表达出分子量33KD的MS2-PRa融合蛋白.每升摇菌液的蛋白表达量约为30mg.表达产物免疫BALB/C小鼠,制备出4株分泌抗人PR单克隆抗体(PRMcAb)的杂交瘤细胞株.Western blotting结果表明,4种PRMcAb与天然人PR的A、B分子均能特异性结合.以自制的PRMcAbs采用免疫组化(IHC)技术检测了47例乳腺癌的石蜡切片,结果与进口PRMcAb的IHC及葡聚糖包裹活性碳(DCC)分析法高度相关,符合率分别为100%和81%.采用RT-PCR技术扩增了7例人乳腺癌标本雌激素受体(ER)外显子4~6(共438bp)区段,扩增产物转移到硝酸纤维素膜后,以〔r-<32>P〕-ATP标记的人ER寡核苷酸探针与之杂交,2例在维438bp与300bp处出现特异的杂交带,进一步将300bp变异的条带进行序列分析,结果表明这2例肿瘤含外显子5完全缺失变异的ER.同样技术分析了12例人乳腺癌标本ER外显子3~7(共911bp)区段,发现8例存在外显子部分缺失变异的ER.
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